通過對B9細胞的反復克隆,篩選出對IL-11高度敏感的B9-11細胞株,可用于IL11的檢測。
1.B9-11細胞的克隆 ①向96孔培養(yǎng)板中每孔加入100uL含5%FCS和100ng/mL rIL-11的PMI-1640培養(yǎng)液;②加B9-11細胞于每孔l、3、9和27個細胞,每一細胞濃度做一板,培養(yǎng)2周,陽性生長孔定期更換培養(yǎng)液和補充rIL-1③取出生長較好孔內細胞,測其對IL-11的敏感度,所需IL-11濃度zui低的細胞克隆為B9-11克隆。
2.在96孔板中每孔加50rtl用含5%FCSRPMI-1640系列稀釋的待測樣品和5X103B9-11細胞,每孔終體積為150$tL。5%c02 37~C溫箱中培養(yǎng)4d
3.加MTF溫育4h,加酸化異丙醇溶解甲臘,測630nm—5701an的吸光度值。IL-11活性以UTll65表示,即B9-11細胞發(fā)生50%zui大增殖時稀釋度的倒數(shù)除以30(因B9-11細胞對IL-11的敏感度為T1165細胞的30倍)。
4.注意事項 測定生物標本應加抗IL-6McAb以中和IL-6對結果的影響。
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