牛白蛋白ELISA試劑盒是一種用于定量牛血清白蛋白的夾心免疫測定試劑盒蛋白質或抗體樣品、重組蛋白、細胞提取物中的血清白蛋白（BSA），培養細胞、培養基或任何其他暴露于牛的生物樣本血清或胎牛血清，并且可能含有痕量的BSA（宿主細胞蛋白或HCP）。到期由于試劑盒的高靈敏度和血清中白蛋白的高濃度，該試劑盒可能不會適用于測量血清中的白蛋白，或在BSA可能普遍存在的情況下，如測試環境中的污染物。建議使用ADI ELISA試劑盒#8000作為用于測量血清或其他含有高BSA的樣本中BSA的替代方法濃度。此套件僅供研究使用。

牛白蛋白（BSA）ELISA試劑盒檢測原理：

牛白蛋白ELISA試劑盒基于樣品中牛白蛋白與兩種抗體的結合抗體，一種固定在微量滴定孔上，另一種與辣根結合過氧化物酶（HRP）。洗滌步驟后，加入顯色底物并著色由HRP在TMB底物上的酶反應產生，直接與樣品中存在的BSA的量成比例。停止解決方案已添加到終止反應，然后使用ELISA微量滴定儀測量450nm處的吸光度好讀者。樣品中BSA的濃度根據以下標準曲線計算某種濃度的純化牛白蛋白。

艾美捷牛白蛋白（BSA）ELISA試劑盒：

貨號：ADI-8100

特異性：本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與牛血清白蛋白（BSA）反應，并且與其他牛血清蛋白幾乎沒有反應性。

在1%血清濃度下檢測以下物種的血清，顯示出的活性低于5 ng/ml：人、猴、羊、山羊、兔子、倉鼠、小鼠。

標準品的值分配：試劑盒中的標準品濃度已校準至Sigma Chemical的BSA標準品，貨號#P0914，以及Thermo Scientific的次級參考品，貨號#23209，這是對NIST BSA #927e的次級參考。

靈敏度：基于3次運行中13個重復樣本的檢測，0.5ng/ml樣本的3倍標準差（SD）范圍與陰性樣本稀釋液的3倍SD范圍不重疊。

因此，牛血清白蛋白ELISA的靈敏度可以被認為是250-500 pg/ml。

正常范圍：對來自四個不同來源的胎牛血清進行檢測，顯示白蛋白濃度范圍為6.9至15.2 mg/ml。

精確度：含有低濃度和中等濃度BSA的樣本在多個檢測中作為重復樣本進行檢測（n=5），以獲得檢測間的可重復性。

使用點對點曲線擬合程序計算濃度的變異系數（CVs）。

BSA濃度的測量顯示出良好的檢測間可重復性（5.7至9.7% CV）。

結果計算：

可以使用任何免疫分析軟件包來計算結果。推薦使用四參數曲線擬合。如果軟件不可用，可以按照以下方法確定牛血清白蛋白（Bovine Albumin）濃度：

1. 計算重復樣本的平均OD值。

2. 在坐標紙上，將標準品的平均OD值（y軸）與牛血清白蛋白的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點繪制最佳擬合曲線以構建標準曲線。點對點的構建是最常見和可靠的方法。

3. 可以通過標準曲線的插值來確定未知樣本和對照中的牛血清白蛋白濃度。

4. 將樣本獲得的值乘以每個樣本的稀釋因子。

5. 對于產生信號高于80 ng/ml標準品的樣本，應進一步稀釋并重新檢測。

所需材料及未提供的材料：

? 能夠提供100μl和1-10ml的移液器和移液管。推薦使用多通道移液器。

? 用于稀釋樣本和抗BSA-HRP濃縮液的一次性玻璃或塑料5-15ml試管。

? 用于稀釋洗滌液濃縮液和樣本稀釋液濃縮液的量筒；200ml至1L，存放瓶。容器絕不能用于測量含有BSA的試劑。

? 用于稀釋試劑濃縮液的蒸餾水或去離子水。

注意事項和安全指南：

標準品、對照品、樣本稀釋液和HRP抗體含有溴硝基二氧六環（BND：0.05%，重量/體積）。終止液含有1%硫酸。請遵循良好的實驗室操作規范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。

如果MSDS（材料安全數據表）尚未存檔，可以向ADI網站索取或獲得TMB、硫酸和BND的MSDS。

樣本收集和處理：

培養基、細胞提取物、重組蛋白或其他生物流體在適當稀釋以避免溶液基質干擾的情況下可以用作樣本。尚未研究螯合劑（尿素、鹽酸胍等）、洗滌劑（NP40、SDS等）、高鹽濃度或低或高pH值的影響。含有這些試劑的樣本應稀釋在工作樣本稀釋液中以避免檢測干擾。高濃度BSA標準品可以與稀釋后的樣本混合，以評估適當的BSA回收率。