內質網

內質網是由一層單位膜圍成的連續的網狀膜系統，可分為糙面內質網（Rough Endoplasmic Reticulum，RER）和光面內質網（Smooth Endoplasmic Reticulum，SER）。

內質網染色的意義

1、觀察內質網形態結構：

染色后可以在顯微鏡下清晰地觀察到內質網的形態、大小、分布以及與其他細胞器的關系。這有助于深入了解內質網在不同細胞類型、不同生理狀態下的結構特點，為研究內質網的功能提供基礎。

2、疾病診斷

在某些疾病狀態下，內質網的結構和功能會發生改變。通過內質網染色可以觀察到這些變化，為疾病的診斷提供線索。例如，在一些神經退行性疾病、肝臟疾病和癌癥中，內質網的形態和分布可能會出現異常。

3、病理機制研究：

有助于研究疾病發生發展的病理機制。例如，在一些內質網應激相關疾病中，內質網染色可以揭示內質網應激的程度和持續時間，以及內質網應激對細胞功能和存活的影響。

ER-Tracker介紹

ER-Tracker是一種用于標記和研究細胞內質網的熒光探針。它能夠特異性地結合內質網，發出明亮的熒光信號，使研究人員能夠在顯微鏡下清晰地觀察內質網的形態、結構和動態變化。ER-Tracker廣泛應用于細胞生物學、生物醫學等領域，為研究內質網的功能和相關疾病提供了重要的工具。

應用原理

ER-Tracker通常是一種小分子熒光染料，其分子結構中含有能夠與內質網特異性結合的基團。當ER-Tracker進入細胞后，會通過擴散或主動運輸等方式進入內質網，并與內質網中的特定分子結合。這種結合是高度特異性的，使得ER-Tracker能夠在細胞內選擇性地標記內質網，而不與其他細胞器發生非特異性結合。不像傳統的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現對內質網的染色，且對細胞幾乎無毒性。使用以下提供的優化步驟對活細胞染色后用醛固定，可以部分保留活細胞的染色特征。

運輸和保存方法

冰袋運輸。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反復凍融。

使用方法

1. 使用前將ER-Tracker Blue-White DPX 回溫至室溫，并簡短離心使該DMSO溶液至管底。

2. 將1 mM ER-Tracker Blue-White DPX儲存液按照實驗要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度 100 nM-1µM。建議在不影響 實驗結果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進行染色，可得到最佳實驗結果。

3. 染色對于貼壁細胞，吸除培養皿中培養基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液于37℃孵育細胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養液，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。

注：由于ER-TrackerBlue-White DPX 探針具有較高光敏感性，會產生波動較大的發射吸收峰值，使用長通 DAPI 濾光片效果理想。另，操作過程中需盡量避光。

常見問題

Q: 請問固定后的死細胞還能染上嗎？

A: 該探針主要染的是活細胞的內質網，固定樣本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎？

A: 活細胞的染色，不需要加抗熒光淬滅封片液。

Q: 請問mito-tracker green 和 ER-traker red是同時染還是分開依次染，染完后熒光可持續多久（也就是在多長時間內還可以檢測）？

A: 建議分開依次染色，熒光均存在淬滅的現象，染色完建議盡快檢測，一般1小時內檢測熒光強度基本變化不大。

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