產(chǎn)品介紹

阿爾瑪藍（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸亮度變化和熒光信號。這是一種安全無毒的染料，可用于細胞活性和細胞增殖的定量分析以及細胞因子生物測定和體外細胞毒性研究，能有效測定動物、真菌和細菌細胞的天然代謝活性。

技術(shù)原理

Alamar Blue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，反映所研究的細胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細胞和細菌的代謝活動。

這種測定是基于具有代謝活性的細胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。在細胞增殖過程中，細胞內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到細胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低。可以用普通分光光度計或熒光光度計檢測，其激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。吸光度和熒光強度與活性細胞數(shù)成正比。

產(chǎn)品特點

本品可廣泛地用于細胞增殖代謝，藥物的細胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。 與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優(yōu)勢。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測細胞的增生狀態(tài)。由于Alamar Blue對細胞無毒、無害，不影響細胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細胞的增生狀態(tài)進行連續(xù)觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細胞正常代謝的特點。 

運輸與保存方法 

冰袋運輸。4oC避光保存，一年有效。

使用方法

一、制作標準曲線（測定最佳孵育時間和細胞數(shù)量）

1、每孔加入100微升細胞懸液（對數(shù)生長期細胞），對細胞計數(shù)。按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復(fù)孔。

注：設(shè)置陰性對照：細胞培養(yǎng)基中不加入細胞；陽性對照：100微升100%還原型Alamar Blue（不含細胞）。

2、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

3、放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）一定時間。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入下一步。

4、繪制標準曲線。

二、細胞毒性和細胞增殖檢測

1、每孔加入100微升細胞懸液（對數(shù)生長期細胞），對細胞計數(shù)。建議細胞數(shù)量為104/mL，具體每孔需要的細胞數(shù)量，需根據(jù)細胞類型決定。

2、 細胞中加入待檢測藥物，為檢測藥物對細胞增殖的作用，請設(shè)置合適的對照組，包括刺激細胞和非刺激細胞。

3、混勻，放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）一段時間。

4、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

5、放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）4 - 8 h，最佳孵育時間取決于細胞類型。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入下一步。

6、推薦用熒光分光光度計檢測，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。

7、普通分光光度計在570nm測定吸光度，參考波長600 nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

常見問題

Q：還原率的計算其中一步是還原型陽性對照熒光值減去陰性對照的熒光值，減去后成負值？

A：陽性對照的值比實驗組高，需要重新制備。陽性對照是100%還原的，高溫使得阿爾瑪藍變成還原態(tài)的。

Q：Alamar Blue 阿爾瑪藍,使用是需要高壓滅菌是吧?

A: 阿爾瑪藍本身是無菌的。只有制備還原型的時候需要滅菌。不能對濃縮的Alamar Blue高壓滅菌。

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