酒曲中含有大量的微生物，其中有霉菌、酵母和細菌，在液體中，酵母生長比霉菌快，而酸性培養基酵母比細菌生長更適宜。因此，利用這一特性，可先將酒曲中的霉菌與細菌數目減少，甚至消除（生理純化法），然后用平板法分離酵母。此法較為簡單。
1．配制培養基
（1）酸性蔗糖豆芽汁（加乳酸0.5%）培養液分裝試管，滅菌。
（2）蔗糖豆芽汁瓊脂，分裝試管和三角瓶，滅菌。
2．分離
（1）用滅菌過的小刀，割開曲塊，挖其中米粒大小1塊投入酸性培養液中，搖動后將該管置于25℃恒溫培養箱（上海凱朗儀器設備廠 試驗箱、培養箱、干燥箱）中培養，兩天后轉到另一管酸性培養液中，見到霉菌絲球即行剔除。然后每隔兩日轉接一次，一周后分離。
（2）zui后將轉接試管酸性培養液中的酵母直接用稀釋平板法進行分離，培養后，分別移植單獨的酵母菌落于蔗糖豆芽汁斜面上，貼上標簽，標明菌株編號以及移植日期，置于培養箱中培養，待長出、分純后即可進行鑒定。