氫乙啶作為測量活性氧物種的探針有效地工作。染料自由進入細胞并脫氫為乙錠化合物。該探針已被廣泛用于NK細胞，并作為鑒定腫瘤中增殖和缺氧細胞的重要染料。已經使用中性粒細胞和內皮細胞以及HL60細胞和巨噬細胞進行了研究。這種探針的一個主要優點是它能夠區分超氧化物和過氧化氫。熒光發射發生在600nm左右。

氫乙錠[二氫乙錠]的化學結構

艾美捷AAT Bioquest-Hydroethidine二氫乙錠：

貨號 15200

單位尺寸 25 毫克

分子量 315.41

溶劑 DMSO

激發（納米） 500

發射（納米） 582

預期用途 僅用于研究（RUO）

風險短語 R20, R21, R22

儲存 冷凍（< -15°C）；盡量減少光照暴露

熒光微孔板讀取器

激發 520 納米

發射 600 納米

截止 550 納米

推薦板 實心黑色

庫存溶液的準備：

除非另有說明，所有未使用的庫存溶液應在制備后分成單次使用的小份，并儲存在-20°C。避免反復凍融。

配制5-10 mM的DMSO庫存溶液。注意：未使用的DMSO庫存溶液應分裝到單次使用的小瓶中，并儲存在-20°C。避光保存。

工作溶液的準備：

在生理緩沖液（如PBS、HBSS、HEPES）中配制5-20 µM的染料工作濃度。注意：您的應用的最佳工作濃度必須通過實驗確定。

樣品實驗方案：

將等體積（例如100 µL的細胞在生長介質中）的染料工作溶液加入到細胞中，然后在室溫或37°C下孵化細胞5至60分鐘。

在將細胞暴露于實驗誘導因素之前，確定加載細胞的樣本的基線熒光強度。

陰性對照應按以下方式評估：

檢查染料和緩沖液/介質的無細胞混合物的熒光，無論是否含有誘導劑。在沒有細胞外酯酶和其他氧化酶的情況下，隨時間熒光的逐漸增加可能與自發水解、大氣氧化和/或光誘導氧化有關。

檢查未經處理（對照）的加載細胞的熒光，這些細胞一直在生長介質或緩沖液中維持。在健康細胞中，氧自由基被細胞酶和/或天然抗氧化劑清除。在染料加載恢復期之后，健康細胞應表現出在實驗期間相對穩定的低水平熒光；然而，可能觀察到熒光的逐漸增加（由于自氧化）或減少（由于細胞中染料的丟失或光漂白）。在沒有任何刺激或誘導的情況下，健康、未經處理的細胞中熒光的突發可能表明細胞死亡的進展或其他氧化事件。

陽性對照可以用叔丁基過氧化氫（TBHP）刺激至約100 µM的最終濃度（根據細胞的敏感性和反應增減劑量）。

文獻參考：

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The confounding effects of light, sonication, and Mn(III)TBAP on quantitation of superoxide using hydroethidine

Authors: Zielonka J, Vasquez-Vivar J, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2006): 1050

Pulse radiolysis and steady-state analyses of the reaction between hydroethidine and superoxide and other oxidants

Authors: Zielonka J, Sarna T, Roberts JE, Wishart JF, Kalyanaraman B.

Journal: Arch Biochem Biophys. (2006)

Generation of superoxide anion by equine spermatozoa as detected by dihydroethidium

Authors: Burnaugh L, Sabeur K, Ball BA.

Journal: Theriogenology. (2006)

Analysis of dihydroethidium-derived oxidation products by HPLC in the assessment of superoxide production and NADPH oxidase activity in vascular systems

Authors: Fern, undefined and es DC, Wosniak J, Pescatore LA, Bertoline MA, Liberman M, Laurindo F, Santos CX.

Journal: Am J Physiol Cell Physiol. (2006)

Mechanistic similarities between oxidation of hydroethidine by Fremy's salt and superoxide: stopped-flow optical and EPR studies

Authors: Zielonka J, Zhao H, Xu Y, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2005): 853

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