GSH-FITC,即谷胱甘肽(Glutathione,簡稱GSH)與異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocyanate,簡稱FITC)的結合物,是一種重要的生化試劑和熒光標記探針。
一、分子結構與原理
分子結構:
GSH是一種三肽類化合物,由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成,其分子結構中包含一個巰基(-SH)。
FITC是一種熒光染料,具有明亮的黃綠色熒光,其分子結構中包含一個異硫氰酸基團(-N=C=S)。
結合原理:
FITC的異硫氰酸基團可以與GSH分子中的巰基或氨基發生反應,形成穩定的共價鍵,從而將熒光素分子標記在GSH上。
二、性質與特點
熒光特性:
GSH-FITC繼承了FITC的熒光特性,具有明亮的黃綠色熒光,可以用于熒光成像和檢測。
穩定性:
GSH-FITC在適當的儲存條件下(如避光、低溫)具有較高的穩定性,可以長時間保存。
生物相容性:
由于GSH是細胞內廣泛存在的抗氧化劑,因此GSH-FITC具有較好的生物相容性,可以用于細胞內的熒光標記和檢測。
三、應用
細胞內GSH檢測:
GSH-FITC可以作為熒光探針,用于檢測細胞內的GSH水平。通過熒光顯微鏡或流式細胞儀等手段,可以實現對細胞內GSH的定量分析。
藥物遞送與追蹤:
GSH-FITC可以作為藥物遞送載體的一部分,將藥物分子負載在載體上,并通過熒光標記實現藥物的追蹤和定位。
生物醫學成像:
利用GSH-FITC的熒光特性,可以實現細胞或組織的熒光成像研究,幫助研究者觀察復合體系在生物體內的分布和代謝情況。
蛋白質相互作用研究:
GSH-FITC還可以作為探針,研究GSH與細胞內其他分子的相互作用,為深入理解細胞內的生理過程提供有力工具。
四、制備與純化
制備:
通常需要將FITC溶解在適當的有機溶劑中(如二甲基亞砜,DMSO),然后將GSH溶解在適當的緩沖溶液中(如磷酸鹽緩沖液,PBS)。在適當的pH和溫度下,將FITC溶液逐滴加入到GSH溶液中,反應數小時至過夜,形成GSH-FITC結合物。
純化:
反應完成后,需要通過透析、凝膠過濾或高效液相色譜(HPLC)等方法,將未反應的FITC和其他雜質從GSH-FITC結合物中分離出來,得到純化的GSH-FITC。
五、注意事項
儲存條件:
GSH-FITC應儲存在避光、低溫的條件下,以保持其穩定性和熒光特性。
使用范圍:
GSH-FITC僅用于科研目的,不能用于人體實驗或治療。
GSH-FITC是一種具有廣泛應用前景的生化試劑和熒光標記探針,其在細胞內GSH檢測、藥物遞送與追蹤、生物醫學成像以及蛋白質相互作用研究等領域具有重要的作用。
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