關于是否應對胎牛血清進行熱滅活處理一直存在爭議。血清滅活起源于20世紀70年代之前,在過去并未有人質疑滅活的必要性,滅活一直是默認的常規操作。然而越來越多的證據表明,血清熱滅活對細胞并沒有顯著的正面作用。隨著研究者們對血清的理解加深以及胎牛血清生產工藝的不斷進步,如今熱滅活不再是必選項。
什么是滅活
血清熱滅活是指將溶解狀態的血清置于56℃水浴加熱30min。滅活的主要目的是為了去除血清中的補體成分或者支原體等病原體。
什么是補體
補體是存在于動物血液與組織液中的一組經活化后具有酶活性的蛋白質,它們可輔助特異性抗體完成免疫溶菌和溶血作用,故稱為補體。激活的補體可介導細胞毒性作用,刺激平滑肌細胞收縮,刺激血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞等。
血清中的補體
胎牛的補體系統的發育不完整,因此胎牛血清中的補體含量非常低。Triglia和Linscott測定了牛血清中9種補體成分:胎牛血清中凝集素、C1和C6的含量約為成年牛的1-3%,除C3外其余成分的含量約為成年牛的5-50%,C3活性幾乎檢測不到。在補體結合試驗中,在未稀釋的血清中并未出現溶血現象。
熱滅活對細胞的影響
熱滅活并不會改善細胞的狀態。加熱血清會導致生長因子、維生素、氨基酸等多種營養物質被破壞,反而影響細胞的增殖速度和貼壁能力。有研究表明,熱滅活會損害血清中一些促進細胞附著的成分。除此之外,熱滅活過程中還會產生大量的沉淀,這些沉淀物可能被誤認為是微生物污染,從而給實驗帶來不必要的困擾。
支原體問題
尚恩生物血清產品經過萬級GMP標準過濾灌裝線,連續3道0.1um濾膜過濾。通過細菌、真菌、支原體、噬菌體、病毒等多種病原體檢測,完quan不用擔心污染問題,也不需要用熱滅活的方式進行滅菌。
綜上,對于細胞培養效果而言,血清滅活可能弊大于利。因此大部分細胞培養沒有必要進行血清滅活去除補體。不過在某些特殊情況下,如某些免疫學相關實驗或平滑肌細胞相關實驗,可能需要對血清進行滅活處理。在實際應用中,同學們還是要根據實驗需求來決定是否滅活血清哦~
參考文獻
1. Triglia, R.P., Linscott,W.D. Titers of nine complement components, conglutinin and C3b-inactivator in adult and fetal bovine sera. Mol Immunol 17, 741-748 (1980).
2. Application-specific technical information – Application Notes: Heat inactivation – Are you wasting your time? Reprinted from Art To Science, 15, No. 1
3. Giard, D.J. Routine heat inactivation of serum reduces its capacity to promote cell attachment. In Vitro Cellular & Developmental Biology 23, 691-697 (1987).
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