小鼠Toll樣受體-2（TLR-2）ELISA試劑盒 （用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內）原理本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠TLR-2 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 TLR-2與單抗結合，加入生物素化的抗小鼠TLR-2，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液，在450nm處測OD值，TLR-2濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中TLR-2濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標板（Coated Wells）96孔酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate）12ml10×標本稀釋液（Sample Buffer）12ml20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）50ml標準品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMB Solution）12ml*抗體工作液（Biotinylated Antibody）12ml終止液（Stop Solution）12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。血清、血漿作1：2稀釋（取100ul，加標本稀釋液100ul,稀釋2倍）。細胞培養上清可以不做稀釋直接檢測。2.標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成40ng/ml的溶液。設標準管8管，*管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。3.每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。結果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。3.根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應TLR-2含量，再乘上稀釋倍數即可。試劑盒性能 1. 靈敏度：zui小的TLR-2 檢測濃度小于40pg/ml。2.特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠TLR-2。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。3.重復性：板內、板見變異系數均小于12％。注意事項 1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。 2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。 3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。 4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。 5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！