手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
人膀胱癌細胞的培養(yǎng)通常遵循以下步驟和條件：
一、培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：常用RPMI-1640或DMEM等培養(yǎng)基，并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的雙抗(青霉素/鏈霉素)以提供必要的營養(yǎng)和防止污染。
培養(yǎng)環(huán)境：細胞需在37℃、5% CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
二、培養(yǎng)步驟
復蘇：
將凍存的細胞從液氮中取出，迅速置于37℃水浴中搖晃解凍。
解凍后，將細胞懸液轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，接種至培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
第二天換液并檢查細胞密度。
傳代：
當細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代。
棄去舊培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1~2次。
加入適量的胰蛋白酶消化液(如0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1~2分鐘。
在顯微鏡下觀察細胞消化情況，待細胞大部分變圓并脫落后，加入培養(yǎng)基終止消化。
輕輕吹打細胞，使其脫落，并轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按1:2到1:5的比例分到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存：
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行凍存。
棄去舊培養(yǎng)基，用PBS潤洗細胞后，加入胰蛋白酶消化液消化細胞。
消化完成后，加入培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打細胞使其脫落。
將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用凍存液(如90%FBS+10%DMSO)重懸細胞，并調(diào)整細胞密度至適宜范圍。
將細胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml左右，并標注好細胞名稱、代數(shù)、日期等信息。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80℃冰箱過夜，然后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
三、注意事項
無菌操作：整個培養(yǎng)過程中需嚴格遵循無菌操作原則，防止細胞污染。
消化時間：消化時間需根據(jù)細胞類型和胰蛋白酶活性進行調(diào)整，避免消化過度導致細胞損傷。
換液周期：一般每2~3天換一次液，以保持培養(yǎng)基的新鮮和營養(yǎng)充足。
細胞狀態(tài)觀察：定期觀察細胞生長狀態(tài)，包括細胞形態(tài)、密度、生長速度等，以便及時調(diào)整培養(yǎng)條件。
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心