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人骨肉瘤細胞的培養方法面臨以下挑戰：
細胞異質性和來源限制：
人骨肉瘤細胞系(如U-2 OS、Saos-2、MG-63等)具有顯著的異質性，不同細胞系的生物學行為可能不同，導致實驗結果的重復性較差。此外，細胞來源通常為患者腫瘤組織，獲取難度較大且數量有限，限制了大規模實驗的開展。
體外模型與體內環境的差異：
體外培養的細胞系可能無法模擬體內腫瘤的微環境，如三維結構、細胞間相互作用、基質成分和免疫細胞等。這種差異可能導致體外實驗結果與臨床實際存在偏差，影響藥物療效評估的準確性。
細胞污染和穩定性問題：
細胞培養過程中容易受到細菌、真菌或支原體污染，導致實驗失敗。此外，長期傳代的細胞系可能出現基因突變或表型改變，影響細胞的穩定性和實驗結果的可信度。
培養條件要求高：
人骨肉瘤細胞對培養條件敏感，需要特定的培養基、血清、生長因子和抗生素等。培養過程中需嚴格控制溫度、濕度、CO?濃度和pH值，任何條件波動都可能影響細胞生長和實驗結果。
耐藥性機制復雜：
骨肉瘤細胞容易對化療藥物產生耐藥性，體外培養中難以模擬體內耐藥機制。研究耐藥性需要結合多種細胞模型和動物實驗，增加了研究難度和成本。
技術操作要求高：
細胞復蘇、凍存和傳代等操作需要嚴格的無菌技術和熟練的實驗技能。操作不當可能導致細胞死亡或污染，影響實驗進度和結果。
倫理和法律限制：
使用患者來源的腫瘤細胞需遵守倫理規范和法律法規，涉及患者知情同意、隱私保護和細胞來源的合法性等問題。
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