人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC)，是從臍帶靜脈中分離出來的原代細胞。這種細胞是研究內皮細胞的模型系統，研究相關的低氧、炎癥、氧化應激、感染反應以及正常和腫瘤相關血管生成等應用。

1：HUVEC細胞形態：

內皮細胞樣，貼壁生長，鵝卵石狀外觀，核大而暗；

在增殖過程中，細胞小且大小均勻，有絲分裂指數高，無平滑肌細胞。

很多小伙伴認為沒有包被培養瓶似乎對培養影響不大，這里建議大家，復蘇和傳代均需要包被，包被后的細胞長的更圓潤飽滿傳代后的貼壁率也會有所提高。
1、在開始操作程序前，提前準備好所需要的試劑，重組人纖連蛋白、pbs磷酸緩沖液，離心管、移液槍、培養瓶等，以確保盡快完成解凍程序。

2、以 T25 培養瓶為例:吸取2.5mlPBS磷酸鹽緩沖液轉移到T25培養瓶中，再將100ul移液槍調到50，吸50ul重組人纖連蛋白加入到T25培養瓶中，加完之后要混勻鋪滿整個瓶子底部 ；包被時間:過夜(12-16h)，至少也需 37℃,2h 以上。

注意事項：細胞復蘇或傳代之前培養瓶需提前2小時包被。

2.HUVEC細胞解凍復蘇

1、提前室溫平衡人臍靜脈內皮細胞專用培養基。

2、準備一個包被好的培養瓶,把剩余包被液吸盡后加入5ml的dpbs 清洗一遍倒掉,再添加 5ml 室溫平衡專用培養基，同時準備一個15mL離心管,添加5ml含10%血清的其他培養基(用于離心）。

3、將凍存管快速在37℃水浴槽中解凍HUVEC細胞,至細胞全部融化(請在1-2分鐘內完成)。

4、立即取出凍存管75%乙醇擦拭消毒凍存管表面，轉移至生物安全柜，將細胞懸液加入到提前準備好的離心管里。

5、在室溫，200g(1000rpm)離心5min。

6、棄去上清 ,用手指彈松細胞沉淀 ,添加 2ml專用培養基重新懸浮細胞后，接種至1個T25培養瓶中，培養瓶中總共完培5-7ml。“畫8字法”使細胞均勻分布。

7、在 37℃、5%CO2 和 95%空氣條件下進行細胞培養,透氣瓶可直接放入培養箱，非透氣請擰松放入培養箱。

8、在復蘇后第二天16h后可觀察貼壁情況,有少量漂浮可以不用換液,約3-4天可進行傳代。
3.HUVEC傳代：

注意：當HUVEC細胞密度達到85%-95%時，即可進行傳代。

1、棄去培養液,用 PBS 洗滌 1-2次;

2、將 Trypsin-EDTA.(0.05%)(語純生物貨號:YC-5004)、 huvec細胞培養基（語純生物貨號：CC0122）、含 10%FBS 其它培養基(用于終止液)置于室溫平衡。

3、棄去培養瓶中培養基,用 5ml 無鈣鎂離子 PBS 緩沖液(語純生物 貨號:YC-5013)清洗細胞層盡量去除液體后加入 1ml 的 0.05%胰酶消化液 37℃消化至細胞變圓,用手輕拍瓶尾成流沙樣脫落;脫落率約 80%。

4、此時,立即加入3-5ml其他完培培養基(含10%血清)終止消化,輕柔吹打瓶內3-6下,將細胞懸液轉移到15ml離心管,200g(1000rpm)室溫離心5min;

5、棄上清，用手指彈松細胞細胞沉淀，加入新鮮專用培養基后視推薦傳代比例和細胞計數后進行接種若干新的T25培養瓶中;培養基t25添加5-7ml；

6、每2天更換一次培養基。