最新 2025 版藥典四部通則 3203《聚山梨酯 80 測定法》在原來比色法的基礎上增加了第二法熒光膠束法。原有比色法用到銨鈷硫氰酸鹽和二氯甲烷，具有一定的毒性，環境不友好，且需要復雜的樣品前期準備和處理，而新增的第二法熒光膠束法（HPLC-FLD）采用液相色譜系統內衍生反應，無需樣品前處理，無需色譜柱分離，整個檢測過程在 2 分鐘之內完成，簡單高效，非常適合生物制品及其他藥物制劑中聚山梨酯含量的準確測定。

基于一種疏水熒光染料 N- 苯基 -1- 萘胺（NPN）可與聚山梨酯膠束的非極性疏水性內核結合，這種聚山梨酯膠束 -NPN 復合物的熒光強度與聚山梨酯膠束濃度呈正相關，因此可以對聚山梨酯進行定量測定。

參考 25 版藥典的方法，我們設置了如下的 HPLC-FLD 的液相分析方法：

在此條件下，聚山梨酯 80 在 2 min 之內出峰，峰形較好（圖 2），且峰面積穩定（如圖 3），而且在高濃度進樣后，系統沒有任何殘留影響。

同時我們進不同濃度的聚山梨酯 80 的對照品溶液，在 0.3 – 1.1 mg/ml 濃度范圍內線性相關性好（圖 4）。

對實際單抗制劑中聚山梨酯 80 的含量進行了準確測定，我們看到實際制劑樣品的峰面積的重復性數據特別好。雖然是在衍生管中進行快速的衍生反應，但是衍生的效果穩定且可靠，未受到制劑中高濃度抗體的影響。考慮到有些實驗室環境溫度變化較大的情況下，可以在衍生管前后加上預加熱器，使衍生過程更穩定。

在 HPLC-FLD 方法建立之初，中檢院俞小娟等老師對于 HPLC-FLD 法測定聚山梨酯 80 含量的方法學進行了聯合驗證^[2]，參考文獻的結果，大家可以在安捷倫各種型號的液相上放心使用該方法對聚山梨酯 80 或 20 進行準確檢測分析。

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