5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）作為一種第六種 DNA 堿基，在轉錄調控中具有功能，已在人類和小鼠大腦以及胚胎干細胞（ES）中被檢測到含量豐富。在哺乳動物中，它可以通過 TET 家族的 5-mC-羥化酶介導的 5-mC 氧化反應生成。5-hmC 已被證明具有組織特異性，在培養細胞系中幾乎無法檢測到，而在人類大腦組織中可達 0.6%，在某些其他物種中甚至可高達總 DNA 的 8%。5-hmC 作為一種重要的表觀遺傳修飾在表型和基因表達中的生物學意義已逐漸被認可。例如，幾乎所有癌癥中都表現出全球 5-hmC 含量的降低（DNA 低甲基化），并被提議作為癌癥的分子標志物和治療靶點。

MethylFlash 全球 DNA 羥甲基化（5-hmC）ELISA 簡易試劑盒（比色法） 是一套經過優化的緩沖液和試劑組合，通過特異性檢測 5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）水平，以比色法定量檢測全球 DNA 羥甲基化狀態。該試劑盒采用 EpigenTek 流行的全球 DNA 甲基化技術的第四代技術，進一步改進了前代 MethylFlash 試劑盒，提高了速度、簡便性、靈敏度和可重復性。

本試劑盒還特別優化為與 MethylFlash™ 全球 DNA 甲基化（5-mC）ELISA 簡易試劑盒（比色法） 配對使用，可同時定量檢測甲基化 DNA 和羥甲基化 DNA。

艾美捷MethylFlash全球DNA羥甲基化（5-hmC）極速分析試劑盒（比色法）（#P-1032-48）優勢與特點：

快速：步驟精簡，整個過程僅需 2 小時。

穩健：改進的試劑盒配方使檢測具有更大的“信號窗口”，減少了復孔之間的變異。

便捷：背景噪聲低，無需 DNA 變性或平板封閉步驟。

靈敏：z低可檢測 100 ng 輸入 DNA 中 0.01% 的羥甲基化 DNA。

特異：對 5-hmC 具有高特異性，在樣本 DNA 的指示濃度范圍內不與未甲基化胞嘧啶或甲基化胞嘧啶發生交叉反應。

通用：包含陽性和陰性對照，可檢測任何物種的單鏈或雙鏈輸入 DNA 中的 DNA 羥甲基化。

準確：優化的陽性對照可以按百分比比例化，使檢測結果更準確，并與 HPLC-MS 分析高度可比。

靈活：條孔微孔板格式，適用于手動或高通量分析。

注：基于單一樣本的雙復孔檢測。  

原理與流程：

本試劑盒包含定量檢測全球 DNA 羥甲基化所需的全部試劑。在檢測中，DNA 被固定在經過特殊處理、具有高 DNA 親和力的條孔中。使用基于 5-hmC 單克隆抗體（mAb）的檢測復合物一步法檢測羥甲基化 DNA，然后通過微孔板光譜光度計讀取吸光度進行比色定量。羥甲基化 DNA 的百分比與測量的 OD 強度成正比。

起始材料：

輸入 DNA 應相對純凈，260/280 比值 >1.6，可用水或 TE 緩沖液稀釋。每反應的 DNA 用量范圍為 20 ng 至 200 ng。然而，我們推薦使用 100 ng DNA，這是獲得最佳結果的優化輸入量。

文獻引用：

Aguilera M et. al. (May 2025). Altered Ten Eleven Translocation Methylcytosine Dioxygenase Expression and DNA Hydroxymethylation in a Mouse Model of Prostate Cancer. Prostate.

Im H et. al. (April 2025). Epigenetic and Gene Expression Responses of Daphnia magna to Polyethylene and Polystyrene Microplastics. Molecules. 30(7)

Im H et. al. (April 2025). Epigenetic and Gene Expression Responses of Daphnia magna to Polyethylene and Polystyrene Microplastics. Molecules. 30(7)