一、背景

小鼠腦微血管內皮細胞株是一種用于實驗研究的細胞系，來源于小鼠的腦微血管內皮細胞。這些細胞通常被用于研究腦微血管的功能和疾病，以及進行藥物篩選和實驗驗證等。

小鼠腦微血管內皮細胞株的獲取和培養需要一定的技術和設備支持，建議在專業的實驗室或科研機構進行。同時，由于這些細胞系具有一定的特殊性和差異性，其使用和實驗結果也需要根據具體情況進行評估和分析。

鼠腦微血管內皮細胞株是一種來源于小鼠腦部微血管內皮細胞的細胞系。這些細胞通常在體外培養條件下生長和繁殖，并可以用于研究腦血管疾病的發生機制、藥物篩選和治療等。

二、小鼠腦微血管內皮細胞株具有以下特點

形態特征：小鼠腦微血管內皮細胞株呈多邊形或長方形，大小不一，通常有較多的突起和偽足。

生長特性：小鼠腦微血管內皮細胞株生長迅速，可以在體外培養條件下持續傳代。

耐藥性：小鼠腦微血管內皮細胞株對多種化療藥物具有耐藥性，這使得它成為研究腦血管疾病耐藥性的重要工具。

應用前景：小鼠腦微血管內皮細胞株在腦血管疾病的診斷、治療和預防方面具有廣闊的應用前景。

三、小鼠腦微血管內皮細胞株培養操作

1)復蘇小鼠腦微血管內皮細胞株：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2)小鼠腦微血管內皮細胞株傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

3)小鼠腦微血管內皮細胞株凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

四、應用

小鼠腦微血管內皮細胞株可以用于小鼠神經細胞中CBS催化生成的H2S對腦微血管內皮細胞增殖、遷移和形成血管的影響及與VEGFR2的關系：

在體外觀察了神經元CBS催化產生的H2S對小鼠腦微血管內皮細胞株的增殖、遷移和形成血管的影響,并初步探討了其作用與VEGFR2的關系。

目的：

1、觀察H2S對小鼠腦微血管內皮細胞株增殖遷移的作用。

2、探討VEGFR2與H2S促進小鼠腦微血管內皮細胞株增殖遷移作用的關系。

3、探討細胞內游離Ca2+濃度與H2S促進內皮細胞增殖遷移作用的關系。

4、觀察H2S對內皮細胞血管生成的影響。

方法：

1、進行三種細胞株的傳代培養,利用Transwell系統將小鼠海馬神經細胞(HT22細胞)與小鼠腦微血管內皮細胞株(b End.3細胞)進行共培養。

2、采用siRNA小干擾技術,建立細胞轉染模型。

3、CCK-8法檢測小鼠腦微血管內皮細胞株的增殖。

4、細胞劃痕法和Transwell法檢測小鼠腦微血管內皮細胞株的遷移。

5、甲基藍法檢測共培養體系內H2S的含量。

6、鈣熒光成像法檢測小鼠腦微血管內皮細胞株胞內游離Ca2+濃度。7.血管生成實驗檢測H2S對內皮細胞成管能力的影響。

實驗結果：

1、CCK-8實驗結果表明與溶媒對照組比較,加入H2S供體Na HS(1×10-8～1×10-3.5 M)培養24 h時,小鼠腦微血管內皮細胞株b End.3細胞和人臍靜脈內皮細胞HUVEC細胞增殖有明顯的增強(P<0.01)。VEGF164(10 ng/m L)有類似的增強作用(P<0.01)。結果表明外源性H2S對小鼠腦微血管和人臍靜脈內皮細胞的增殖有明顯的促進作用。與溶媒對照組相比,加入1×10-3.5 M Na HS 1 h時,b End.3細胞和HUVEC細胞的增殖作用不明顯,但在6 h時的增殖作用開始增強(P<0.01),并且在48 h時,Na HS增殖作用進一步增加(P<0.01)。在b End.3細胞和HUVEC細胞中分別加入VEGFR2阻斷劑SU5416 10μM培養24 h對這兩種細胞的增殖均無明顯的影響,但可顯著地抑制1×10-3.5 M Na HS引起的b End.3細胞和HUVEC細胞的增殖(P<0.01),提示外源性H2S促進小鼠腦微血管和人臍靜脈內皮細胞增殖作用可能與VEGFR2有關。

2、細胞劃痕實驗中,與溶媒對照組相比,Na HS(1×10-6～1×10-3.5 M)加入24 h可明顯并呈濃度依賴性地增加小鼠腦微血管內皮細胞株b End.3細胞和HUVEC細胞的遷移面積(P<0.01);Transwell實驗結果表明與溶媒對照組相比,加入Na HS 1×10-3.5 M 24 h可明顯地增加b End.3細胞和HUVEC細胞從Transwell上室膜內遷移到膜外的細胞數(P<0.01)。10 ng/m L VEGF164對小鼠腦微血管內皮細胞株b End.3細胞和HUVEC細胞的遷移面積和遷移細胞數有類似的作用(P<0.01)。結果表明外源性H2S可明顯地促進小鼠腦微血管及人臍靜脈內皮細胞的遷移。SU5416單獨加入24 h對b End.3細胞和HUVEC細胞的遷移細胞數無明顯的影響,但可顯著地減少1×10-3.5 M Na HS或10 ng/m L VEGF164引起的b End.3細胞和HUVEC細胞的遷移細胞數的增加(P<0.01),提示外源性H2S促進小鼠腦微血管及人臍靜脈內皮細胞的遷移可能與VEGFR2有關。

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