百歐博偉生物：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞周圍出現(xiàn)的小黑點(diǎn)可能是由多種因素引起的，這些現(xiàn)象可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響。以下是關(guān)于小黑點(diǎn)的常見(jiàn)原因、影響及預(yù)防措施的總結(jié)：

一、小黑點(diǎn)的常見(jiàn)原因

1、微生物污染

細(xì)菌污染：微小顆粒可能為革蘭氏陽(yáng)性菌（如球菌）或陰性菌，培養(yǎng)液可能渾濁且pH快速下降（變黃）。

真菌/霉菌污染：可能形成菌絲或孢子團(tuán)塊，呈絮狀或點(diǎn)狀。

支原體污染：肉眼不可見(jiàn)，但可能導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。

2、細(xì)胞碎片或死亡細(xì)胞

細(xì)胞凋亡或機(jī)械損傷（如吹打過(guò)度）產(chǎn)生的碎片，在高密度培養(yǎng)時(shí)更常見(jiàn)。

3、血清沉淀

部分胎牛血清（FBS）在低溫儲(chǔ)存時(shí)可能形成磷酸鈣或脂蛋白沉淀，呈細(xì)小顆粒。

4、其他污染物

培養(yǎng)器皿或耗材未清洗干凈（如殘留的洗滌劑、纖維碎屑）。

黑膠蟲(chóng)（爭(zhēng)議性存在，可能為微生物污染或細(xì)胞代謝產(chǎn)物）。

二、小黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞的影響

1、微生物污染

抑制細(xì)胞增殖，導(dǎo)致細(xì)胞死亡；污染可能擴(kuò)散至其他培養(yǎng)物。

2、細(xì)胞碎片

干擾細(xì)胞貼壁，影響細(xì)胞計(jì)數(shù)和形態(tài)觀察。

3、血清沉淀

可能被誤認(rèn)為污染，干擾實(shí)驗(yàn)操作（如流式檢測(cè)）。

三、鑒別方法

1、顯微鏡觀察

高倍鏡（40×或100×）下觀察小黑點(diǎn)是否移動(dòng)（細(xì)菌可能游動(dòng)）。

染色（如革蘭氏染色）輔助判斷是否為微生物。

2、培養(yǎng)液變化

渾濁、pH顯著下降或出現(xiàn)異味提示微生物污染。

3、支原體檢測(cè)

使用PCR或?qū)Ｓ脵z測(cè)試劑盒。

四、預(yù)防與處理措施

1、預(yù)防微生物污染

嚴(yán)格無(wú)菌操作：在超凈臺(tái)中操作，定期消毒臺(tái)面和器械。

規(guī)范操作習(xí)慣：避免手部經(jīng)過(guò)開(kāi)放培養(yǎng)皿上方，減少說(shuō)話或咳嗽對(duì)培養(yǎng)物的影響。

定期更換培養(yǎng)液：及時(shí)清除代謝廢物和碎片。

分裝試劑：避免反復(fù)解凍導(dǎo)致污染風(fēng)險(xiǎn)增加。

2、減少細(xì)胞碎片

輕柔處理細(xì)胞：避免過(guò)度吹打或離心速度過(guò)高。

優(yōu)化傳代頻率：避免細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)后大量死亡。

離心或過(guò)濾：傳代時(shí)低速離心（如200×g）去除碎片，或使用細(xì)胞篩過(guò)濾。

3、避免血清沉淀

選擇優(yōu)質(zhì)血清：部分品牌血清沉淀較少。

正確解凍：4℃緩慢融化血清，避免反復(fù)凍融。

過(guò)濾處理：若血清沉淀較多，可用0.22μm濾膜過(guò)濾后使用。

4、其他預(yù)防措施

清洗器皿：確保無(wú)洗滌劑或雜質(zhì)殘留。

定期檢測(cè)支原體：建議每1-2個(gè)月進(jìn)行一次。

五、污染后的處理

微生物污染：立即丟棄污染細(xì)胞，消毒培養(yǎng)箱及實(shí)驗(yàn)區(qū)域。

細(xì)胞碎片：換液時(shí)輕柔沖洗，或通過(guò)離心去除。

血清沉淀：不影響細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)可忽略，必要時(shí)過(guò)濾血清。

六、注意事項(xiàng)

避免過(guò)度依賴抗生素：長(zhǎng)期使用可能掩蓋污染或誘導(dǎo)耐藥菌。

血清沉淀≠污染：無(wú)需過(guò)度處理，但需與微生物污染區(qū)分。

通過(guò)規(guī)范操作和定期監(jiān)測(cè)，可有效減少小黑點(diǎn)的出現(xiàn)，保障細(xì)胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。若頻繁出現(xiàn)污染，需系統(tǒng)性排查實(shí)驗(yàn)室環(huán)境或操作流程中的漏洞。

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