二氧化碳搖床(CO?培養箱)的消毒是確保細胞培養環境無菌的關鍵步驟。以下是詳細的消毒步驟和注意事項:
一、消毒前準備
1. 關閉設備
斷開電源,關閉CO?氣源。
取出培養箱內的所有培養物、隔板、水盤等可拆卸部件。
2. 清潔表面污漬
用中性洗滌劑或70%乙醇擦拭內壁、門封和外部,去除可見污垢。
頑固污漬可用無菌蒸餾水或溫和去垢劑處理,避免腐蝕性清潔劑。
二、消毒方法
# 1. 濕熱滅菌(高壓蒸汽)
適用部件:可拆卸的隔板、水盤、支架等耐高溫部件。
步驟:
1. 121℃高壓滅菌15 20分鐘。
2. *底干燥后再放回培養箱。
#2. 化學消毒
常用消毒劑:
70%乙醇:擦拭內壁,作用5 10分鐘。
過氧化氫(3 6%):噴灑或擦拭,靜置30分鐘后用無菌水擦凈。
季銨鹽類(如苯扎氯銨):按說明書稀釋使用。
步驟:
1. 噴灑或擦拭消毒劑,確保覆蓋所有角落。
2. 作用時間結束后,用無菌蒸餾水*底清除殘留。
# 3. 紫外線(UV)照射
使用培養箱自帶的UV燈(若無則需外置UV燈)。
照射時間:30分鐘至1小時(注意避開橡膠/塑料部件)。
注意:UV穿透力有限,需配合其他消毒方式。
# 4. 高溫干熱滅菌(部分型號支持)
設定140℃維持2小時(需確認設備耐受性)。
僅適用于無塑料/橡膠部件的空腔。
三、消毒后處理
1. 重新組裝
安裝已滅菌的隔板、水盤(加入無菌水保持濕度)。
檢查門封是否密封。
2. 預平衡環境
開啟CO?和溫度至設定值(如37℃、5% CO?),穩定24小時后再使用。
可放置無菌PBS或培養基測試無菌性。
3. 驗證消毒效果
使用生物指示劑(如孢子試條)或定期微生物檢測。
四、注意事項
個人防護:戴手套、口罩,避免消毒劑接觸皮膚。
消毒劑選擇:避免含氯或強氧化劑腐蝕不銹鋼內膽。
頻率建議:
常規消毒:每1 2個月一次。
污染后:立即*底消毒。
記錄:記錄消毒日期、方法和責任人。
五、常見問題
霉菌污染:可先用5%碳酸氫鈉擦拭,再消毒。
頑固生物膜:使用酶清潔劑預處理。
氣味殘留:延長通風時間或使用活性炭吸附。
通過規范操作和定期維護,可有效降低污染風險,確保細胞培養的可靠性。
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