噬菌體污染時(shí),添加賽多培®噬菌體抑制劑沒(méi)有效果的原因及解決辦法
賽爾瑞成“賽多培®噬菌體抑制劑(培養(yǎng)基添加用)”是一種在噬菌體污染環(huán)境中仍能夠進(jìn)行微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基添加劑,有效預(yù)防微生物發(fā)酵時(shí)噬菌體污染帶來(lái)的損失。噬菌體是一類侵害細(xì)菌(包括放線菌)的病毒,又稱細(xì)菌病毒,由于它的個(gè)體比細(xì)菌小數(shù)百倍,可以附著于塵埃上隨風(fēng)飄移,因此能長(zhǎng)久地?cái)U(kuò)散和傳播到一定的范圍,并能脫離寄主而存活。它在寄主細(xì)胞內(nèi)能大量迅速繁殖子代噬菌體,如在十幾分鐘至一個(gè)小時(shí)左右,一個(gè)細(xì)胞感染一個(gè)噬菌體后可以釋放出數(shù)十個(gè)至數(shù)百個(gè)子代噬菌體。一旦發(fā)生噬菌體污染,會(huì)導(dǎo)致發(fā)酵異常、倒罐,使科研和工業(yè)生產(chǎn)遭到嚴(yán)重?fù)p失。在發(fā)酵工業(yè)中,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵菌浸染噬菌體后,就要從菌種,培養(yǎng)基,環(huán)境,發(fā)酵系統(tǒng)管路,地溝,污水池,排風(fēng)口等進(jìn)行全面的消毒排查,消毒流程十分繁瑣。一般情況下,實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)線需要暫停發(fā)酵兩周到一個(gè)月的時(shí)間,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)進(jìn)度。
經(jīng)多次嚴(yán)格試驗(yàn)測(cè)試,賽爾瑞成 “賽多培®噬菌體抑制劑(培養(yǎng)基添加用)”對(duì)溫和噬菌體和烈性噬菌體均具備出色的抑制作用,能夠?qū)崿F(xiàn)菌體的正常生長(zhǎng)和蛋白表達(dá)。
賽爾瑞成根據(jù)實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn),可以通過(guò)下面方法對(duì)培養(yǎng)體系的污染情況進(jìn)行判斷:
如果只有細(xì)胞碎片,大概率是噬菌體污染;
如果OD600值在1以下時(shí)菌出現(xiàn)死亡(菌體生長(zhǎng)1-3小時(shí),誘導(dǎo)前),則考慮烈性噬菌體污染;
如果菌前期生長(zhǎng)正常達(dá)到誘導(dǎo)條件,OD600值在0.8以上,菌在降溫誘導(dǎo)之后逐漸開(kāi)始死亡(有些1-3小時(shí),有些5小時(shí)左右),則考慮溫和噬菌體污染;
如果同一品種菌在多搖瓶中發(fā)生上述不同死菌現(xiàn)象,例如不同發(fā)酵周期,有些誘導(dǎo)前死,有些誘導(dǎo)后死,那么考慮混合型污染。
如果同時(shí)伴有白色絮狀物,或粘性的,或拉絲狀的,或蘑菇狀的,或有聚集狀白色的,則考慮伴隨雜菌污染。
添加賽多培®噬菌體抑制劑沒(méi)有效果的原因有多種,常見(jiàn)有如下原因及解決辦法:
①搖瓶培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)過(guò)夜菌不長(zhǎng),大概率是菌種活性問(wèn)題,同時(shí)也需要觀察是否存在培養(yǎng)條件失控、裝液量過(guò)大的情況;
解決辦法:需要重新轉(zhuǎn)化增加菌種活力,劃線再挑一次單克隆(平板上也需要添加噬菌體抑制劑)。
②環(huán)境中噬菌體爆發(fā)期,多為噬菌體混合型污染(既有溫和噬菌體又有烈性噬菌體);
解決辦法:可以增加噬菌體抑制劑添加量到千分之六,極限千分之八,這個(gè)前提是這個(gè)添加量菌可以長(zhǎng)起來(lái),建議增加轉(zhuǎn)速(少量菌可能長(zhǎng)得會(huì)非常慢,持續(xù)搖起來(lái)),后期正常后抑制劑添加量再降低。
③實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部除了噬菌體之外,可能存在真菌、曲霉、金黃色葡萄球菌等雜菌污染;
解決辦法:需要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理、執(zhí)行嚴(yán)格的無(wú)菌操作規(guī)范,以避免雜菌污染帶來(lái)的影響。
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