人末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)是一種依賴于鎂離子或錳離子的 DNA 聚合酶,它與其他 DNA 聚合酶的顯著區別在于,其催化核苷酸聚合時不需要模板鏈的引導,能夠將脫氧核苷酸隨機添加到 DNA 分子的 3' - 羥基末端,因此也被稱為模板非依賴性 DNA 聚合酶。
從分布來看,TdT 主要在未成熟的淋巴細胞中表達,尤其是在骨髓中的前 B 細胞和前 T 細胞階段表達最為活躍。在成熟的淋巴細胞中,TdT 的表達量會顯著降低甚至消失。此外,在某些造血系統惡性腫瘤細胞中,如急性淋巴細胞白血病細胞,TdT 常常會異常高表達,這使得它成為診斷這類疾病的重要標志物之一。
在檢測指標方面,TdT 的表達水平通常以酶的活性單位或蛋白質的濃度來表示。通過特定的檢測方法,能夠準確測定樣本中 TdT 的含量或活性,為相關疾病的診斷和研究提供重要數據。
生理功能
TdT 在機體的免疫系統發育過程中具有重要的生理功能,主要體現在以下幾個方面:
參與免疫球蛋白和 T 細胞受體基因重排:在未成熟淋巴細胞的發育過程中,免疫球蛋白基因和 T 細胞受體基因會發生重排,這一過程是產生免疫多樣性的關鍵。TdT 能夠在基因重排過程中,將隨機的脫氧核苷酸添加到 V、D、J 基因片段連接的末端,增加了基因重排的多樣性,從而使機體能夠產生數量龐大、特異性各異的免疫球蛋白和 T 細胞受體,以應對外界環境中多種多樣的病原體。
促進淋巴細胞的發育成熟:TdT 的表達與淋巴細胞的發育階段密切相關,它在淋巴細胞的早期發育階段發揮作用,參與調控淋巴細胞的分化和成熟過程。通過影響基因重排的多樣性,TdT 有助于篩選出能夠識別自身抗原并產生適當免疫應答的淋巴細胞,對免疫系統的正常發育和功能維持至關重要。
檢測原理
人末端脫氧核苷酸轉移酶 (TdT) ELISA 試劑盒基于酶聯免疫吸附試驗(ELISA)的原理設計而成。該試劑盒的酶標板微孔內預先包被了抗人 TdT 的特異性單克隆抗體,當加入待檢測的樣本(如細胞裂解液、血清等)時,樣本中的 TdT 會與酶標板上的包被抗體特異性結合,形成抗原 - 抗體復合物。
經過洗滌步驟去除未結合的雜質后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗人 TdT 多克隆抗體作為二抗,二抗會與復合物中的 TdT 特異性結合,形成 “包被抗體 - TdT - 酶標二抗” 的夾心結構。再次洗滌后,加入底物溶液(如 TMB),HRP 會催化底物發生顯色反應,顯色的深淺與樣本中 TdT 的含量成正比。最后,使用酶標儀測定各孔的吸光度值,根據標準品繪制的標準曲線,即可計算出樣本中 TdT 的具體含量.
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