三级片视频播放,精品三级片在线观看,A级性爱视频,欧美+日韩+国产+无码+小说,亲子伦XX XX熟女,秋霞最新午夜伦伦A片黑狐,韩国理伦片漂亮的保拇,一边吃奶一边做边爱完整版,欧美放荡性护士videos

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>行業標準>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

DNA的片斷化檢測

來源:上海北諾生物科技有限公司   2013年04月02日 14:42  

 細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮, 染色質DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段, 或180~200bp整數倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。細胞經處理后,采用常規方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細胞量很少,還可在分離提純DNA后,用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)使DNA標記,然后進行電泳和放射自顯影,觀察凋亡細胞中DNA ladder的形成。
   1. 大分子染色體的測定
細胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長的DNA大片段。所有超過一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線性DNA的雙螺旋半徑超過凝膠半徑時,即達到分辨力的極限。此時凝膠不再按分子量的大小來篩分DNA,DNA像通過彎管一樣,以其一端指向電場一極而通過凝膠,這種遷移模式稱之為"爬行"。因此,細胞凋亡早期產生的50~300kbp長的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來分離。通常采用脈沖電泳技術可圓滿地解決這一問題。這個方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場。每當電場方向改變后,大的DNA分子便滯流在爬行管中,直至新的電場軸向重新定向后,才能繼續向前移動。DNA分子量越大,這種重排所需要的時間就越長。當DNA分子變換方向的時間小于電脈沖周期時,DNA就可以按其分子量大小分開。
   參考文獻 Brown,D.G., Sun, X.M., and Cohen, G.M.(1993) Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation. J. Biol.Chem. 268, 3037-3039
   2. DNA Ladder 測定
   方法:收獲細胞(1X107)沉淀?細胞裂解液?13000rpm′5min, 收集上清?1%SDS和RnaseA(5mg/ml)56°C,
2h?蛋白酶K(2.5mg/ml)37°C,2h?1/10體積3M醋酸鈉和2.5倍體積的冷無水乙醇沉淀DNA,4°C過夜?14000rpm′15min?zui后將沉淀溶解在TE buffer中,加DNA Loading Buffer?1.2%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色并照相。
   結果:

  參考文獻 Herrmannm M, Lorenz HM, Voll R et al. A Rapid and simple method for the isolation of apoptotic DNA fragments. Nucleic Acid Res. 1994; 22:5506-5507
   3. 凋亡細胞DNA含量的流式細胞計分析
   方法:收集細胞,70%冷乙醇(in PBS)4°C固定過夜,PBS洗滌,1000rpm′10min RNase A(0.5mg/ml)37°C消化30min PI(50mg/ml)染色,室溫避光15min,FACScan分析DNA亞二倍體的形成及細胞周期的變化。
   結果:

  4. ApoAlertTM LM-PCR Ladder Assay (CLONTECH)
優點:敏感度高,適合于檢測少量樣本,小部分凋亡細胞。如臨床活組織檢測。

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 丽江市| 阿尔山市| 乌审旗| 和林格尔县| 大埔区| 南投县| 大新县| 东丰县| 隆安县| 龙山县| 洛隆县| 枞阳县| 会同县| 瑞安市| 福贡县| 洞口县| 永寿县| 秦皇岛市| 永靖县| 满城县| 巩义市| 沙洋县| 隆林| 鞍山市| 西吉县| 彭山县| 南召县| 平顺县| 澄迈县| 杭锦后旗| 大兴区| 射洪县| 姜堰市| 黄梅县| 大同县| 丰顺县| 册亨县| 浦县| 固阳县| 乐山市| 阿坝县|