細胞種類:COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。
1. 取6孔培養板(或用35mm培養皿),向每孔中加入2mL含1~2×105 個液,37℃CO2 培養至40%~60%匯合時(匯合過分,轉染后不利篩選細胞)。
3. 轉染準備:用2mL不含血清培養液漂洗兩次,再加入1mL不含血清培養液。
4. 轉染:把A/B復合物緩緩加入培養液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉染液,換入正常培養液繼續培養。
1. 以5×105 細胞/孔接種6孔板(或35mm培養皿)培養24小時,使其達到50~60%板底面積。
①在1mL無血清DMEM中稀釋PSV2-neo質粒DNA或供體DNA。
3. 棄去細胞中的舊液,用1mL無血清DMEM洗細胞一次后棄去,向每孔中直接加入1mL DNA/脂質體復合物,37℃培養3~5小時。
4. 再于每孔中加入20%FCS的DMEM,繼續培養14~24小時,
5. 吸出DMEM/DNA/脂質體混合物加入新鮮10%FCS的DMEM,2mL/孔,再培養24~48小時。
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