建立ELISA抗體捕獲法用于檢測HCMVpp65特異性IgM,以確定感染狀態,為HCMV活動性感染診斷試劑盒的研發提供理論和實驗依據。方法:將HCMVAD169株感染HF細胞,粗提HCMV抗原;通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和Western-blotting篩選出HCMVpp65抗原,測定pp65抗原效價及其和特異性抗體的親和力:用辣根過氧化物酶(HRP)標記HCMVpp65單克隆抗體(McAb)。通過抗人μ鏈包被微量滴定板,先后加待檢血清和pp65抗原-酶標McAb復合物,建立ELISA捕獲HCMVpp65特異性IgM抗體方法學。用該法檢測30份兒童、30份孕婦和28份免疫缺陷者的研究血清樣本,并用DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒同步檢測。結果:制備的HCMV-pp65抗原PAGE膠上位于65KD Marker處,呈單一條帶,抗原效價為1:100;HRP-MCAb免疫雙擴效價為1:32;檢測系統各反應物的*稀釋度為抗人μ鏈0. 75μg/孔,待檢血清為1:100,HCMV抗原為1:100,HRP-McAb 1:20:兩種方法的各組陽性率分別為6. 7%、13. 3%、10. 7%和10%、13. 3%、14. 3%,總符合率為91%。結論:建立了簡便、快捷、特異性和敏感性均較高的ELISA捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體法,其檢測結果與DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測試劑盒的總符合率為91%。可用于兒章、孕婦和免疫力低下者,診斷HCMV活動性感染。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。