小鼠

DMEM 無血清DMEM培養基 胰酶 PBS

飯盒 紗布 剪子 鑷子 燒杯 平皿 研磨玻片 濾網 離心管 6孔培養板 吸管 移液管 手套 微量加樣器

一、實驗材料準備
 

1.  動物：小鼠。
 

2.  試劑：DMEM(含血清)、無血清DMEM培養基、胰酶、PBS。
 

3.   器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網、離心管(15/50 ml)、6孔培養板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
 

4.  準備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。
 

二、方法
 

1.   將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
 

2.   剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另一個盛有PBS液的平皿中。
 

2.3 用手術剪將臟器剪成小塊(大小約1mm²)，玻片研磨，轉到離心管，離心(1 000 rpm，5 min)。
 

4.  視組織或細胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
 

5.   加入3-5 ml含血清的培養液以中止胰酶消化作用。
 

6.   用100目孔徑濾網濾過，除去未消化的大組織塊。
 

7.   再次離心5 min，棄上清液。
 

8.   加入無血清培養液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
 

9.  加入含血清的培養液1-2 ml(視細胞量)，血球計數板計數。
 

10.   將細胞調整到5×10⁵/ml左右，轉移至6孔培養板中，37℃下培養