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細胞培養板的選擇-細胞分布不均及解決辦法

來源:上海乾思生物科技有限公司   2014年04月21日 18:47  

 問:我的細胞接種培養板,細胞總是聚集在周邊部分,該如何處理???我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間,是不是板子的質量問題???
答:請問你的細胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養板?如果是后者,而且是轉圈搖勻的話,很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分,導致細胞中間少,四周多!自己可是試試!
周邊一般是相對會多一點,但是中間的數量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養板。
大概是板子的質量問題吧或者是不是鋪板時候的細胞密度太低了?我用的corning的板 。
一個好辦法:在你培養種板之前,把培養板放入培養箱里進行幾個小時的飽和后再取出,種入細胞時力量要輕,可采取用滴頭在培養板孔的側面慢慢加入讓細胞懸液流入板孔中,培養的細胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩,否則你的細胞就會想你說得那樣聚積在一起。 
我今天把培養板放入培養箱里幾個小時,適當的把細胞密度加大了一下,另外多加了一點培養液,今晚看細胞鋪的挺好的。
我認為有兩種可能解決你問題的辦法:
1.加入前吹打均勻;
2.從多孔板側邊或底邊緩慢加入。
我在做原代培養時也遇到過這種情況,我一直以為培養皿鋪膠不均勻會導致這種現象,因為混勻的血管段加入到培養皿中時,在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養皿中,24h后貼壁的血管段就是周邊多,中間相對少些。下次我要試試hkqu戰友的方法看能否改變這種現象。謝謝指點! 
這種現象很正常呀,不知你仔細觀察過沒有,孔直徑愈小,這個現象越明顯,我試過,24、96孔板這種現象不可避免,因為液體的附壁使得孔內培養液不是成一個液平面,而是周邊高,就像凹鏡一樣,而使用這兩種孔板由于需要加干預等原因而不能加足量培養液,使得細胞隨培養液一起出現“邊集”現象,如果為了使孔中央也有均勻細胞而增加接種細胞數量的話,這要看你需要觀察何種指標,如果是MTT ,免疫組化的話會因為細胞成層而影響結果。
贊成hkqu戰友的建議,個人認為消化細胞時要注意吹打均勻,避免細胞成團,而且孔內培養液量要足夠,我一般接種時加足量培養液,加干預時換一次液,干預液加培養液量等于接種時培養液量,這樣的話“邊集”現象會有所改觀,不妨一試。
我想我們做課題,實驗的目的是為了驗證或探索某些理論,而不是要所謂的“好看”,“美”。還記得魯迅的文章《藤野》一文嗎?我們很多年以前學過的,藤野對魯迅說得話大家不防重溫一下,我想這正是我們要學習的地方。
我做的是空斑形成實驗,是細胞鋪成均勻的一層,昨天接種病毒時大部分孔都還好,個別的不太均勻。
現在我細胞實驗也做了一段時間了,但在實驗中平行組的差距還是比較大。
有時候一組數據大多是差不多的,偏偏會跳出一個相去甚遠的數據。
我想應該不是我細胞加入時的問題,因為我的組間差距大是出現在加樣的組中,而對照組的數據卻相當的穩定。另外,我的樣品是*均勻的液體,照理應該是不會出現上述問題的。 
我也出現了這樣的問題。我加入細胞的時候是用吸管邊吹打邊用一毫升的槍加入12孔板中的,可是組內差異仍然很大,想請教一下大家加細胞的時候都有什么方法呀? 
我覺得有幾點:
1.細胞消化后吹打成單細胞懸液很關鍵!保證分板時每個孔的細胞數目是一致的!
2.當然還有你的處理因素各個孔之間的平行也很重要,比如說加藥時,藥物稀釋后混勻,保證每個孔的濃度是一致的!
3.再者加細胞和藥物時,要試驗組和對照組一塊輪流加,避免加樣先后順序導致細胞密度和藥物濃度的差異?。?/div>
吹打已經是均勻了,但是鋪板,6孔,24孔總有些不均勻的哦,有點愛往中間集中。而且明明計數好了鋪了,長一兩天,各個孔密度就有點不一樣,對檢測有影響,能指教一下,有良策嗎?
1.如果用巴氏吸管鋪的話,每次吸取的量不要太多,因為吸管內的細胞會自動向下沉,往往*開始幾個孔細胞數多,經常均勻細胞懸液,加液走S型路線。
2.如果用移液器的話,tips要處理下,把去掉避免損傷細胞,這樣每一次取液對應一個孔。用tip一對一孔加入比較準確。但也要注意混勻懸液。
3.設立平行組,n要足夠大(可以計算一下)。
4.鋪板后不要搖,因為搖動會導致細胞向中間聚集。鋪板一次搞定。 
鋪板后不要做圓周的晃動,做十字晃動,即上下左右晃動,否則會使細胞旋到當中去。 
移液器的槍頭沿著培養板壁加,就不會集中到中間了。

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