血清使用說明

胎牛血清與小牛血清 : 某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可。

儲存條件 : 血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。若存放于4℃時，請勿超過一個月。

血清中絮狀沉淀的處理 : 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白，這是正常特性，不會影響產品性質。  離心血清（400g，1-2分鐘）或簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里。  大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。  一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。

使用濃度:  一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養中的細胞發生變化，特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發生惡性轉化。

解凍方法:  血清從冰箱取出后應慢慢地解凍。在4℃低溫冰箱里放置一天或直到*融化為止。如果時間不允許低溫解凍, 可參考以下解凍方法：   

 1. 將血清從冰箱里取出后，在室溫下放置15-20分鐘。 

 2. 然后將血清放置在37℃水浴槽里。過高溫度會導致血清出現渾濁現象。不要讓水淹沒裝有血清的瓶子。 

 3. 每隔5分鐘左右適當搖晃瓶子，直到*地解凍為止。 

熱滅活方法 : 加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。 

2. 在血清解凍時，將一個容器裝入適量的水，用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內水的溫度。容器大小、質地和裝水的量與裝血清的瓶子相同或相似。 

3. 待血清*解凍時，將含有血清的瓶子放在預熱的56℃水浴里，不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子，以免導致污染。  

4. 在開始加熱處理時，要及時使用溫度計測定模擬瓶內水的溫度。  

5. 在預熱期間，每隔3-5分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子，確保瓶內液體均勻加熱。 

6. 一旦模擬瓶內的水溫達到55.8±0.5℃時，開始計時，并在此溫度范圍內熱處理30分鐘，然后立即放在冰上冷卻。  

為防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉淀現象，熱處理時應注意下 列事項：  

1. 不要用高于25℃以上的溫度加快解凍速度。 

2. 在熱處理之前，要使血清*融解。  

3. 不要使熱處理的溫度高于56.3℃ 4. 熱處理時間不要長于30分鐘。 

5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。

避免事項: 避免反復凍融  長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。  避免產生沉淀  解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

血清分裝時，須規則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。  勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

建議事項: 一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。（100U/mL青霉素；100µg/mL鏈霉素）  

500ml血清分裝過程：

準備滅菌的血清瓶  慢慢解凍，zui后放在室溫平衡下溫度。  滅活  水浴鍋，56℃，30分鐘，并且隨時搖晃均勻。取出，立即放在冰上冷卻|自然冷卻至室溫（約需1-3小時）。在熱滅活過程中，定時適當搖動可以減少沉淀現象的發生。  無菌分裝  轉入無菌間，在超凈臺內將血清分裝入50-100ml血清瓶中（注意預先要將血清輕輕搖動數周、混勻；用吸液管吹出血清時要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠，很容易產生氣泡；如果產生氣泡，則在酒精燈火焰上過一下）封口，并于-20℃保存備用。  使用前融化，置于4℃融化。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。