九、RT-PCR

RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在*條件下進行。

實驗步驟：

1、RNA的提取；

2、反轉錄合成cDNA；

3、PCR擴增；

4、產物的電泳和結果的測定。

十、實時熒光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）

利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。

閾值：是循環開始3～15個循環的熒光信號的標準偏差的10倍，設定在擴增曲線指數增長期。

C(t)值：熒光信號（擴增產物）到達閾值時所經過的擴增循環次數。