RPMI1640*培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號

BW12014

產(chǎn)品內(nèi)容

 使用注意事項

1.在配制*培養(yǎng)基前，請把胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素(P/S)放到2-8℃冰箱一夜解凍。

2.在使用*培養(yǎng)基前，需要把培養(yǎng)基放到37℃恒溫水浴中預(yù)熱，注意溫度不要超過37℃。

3.請把配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個月內(nèi)使用完。避免反復(fù)凍融，若培養(yǎng)基要分幾次使用，請將胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素(P/S)解凍按用量分裝后保存。

 產(chǎn)品用于

僅供研究使用。不適用于人或動物體外診斷與治療。

 培養(yǎng)條件

37℃，5% CO₂，無菌恒溫培養(yǎng)。

★ 相關(guān)操作

細胞復(fù)蘇

1.把*培養(yǎng)基放入37°C水浴中預(yù)熱；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細胞）；
3.在超凈臺中加入5ml的*培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml的*培養(yǎng)基重懸細胞，轉(zhuǎn)移到T-25細胞培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）；
5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.第二天，用新鮮的*培養(yǎng)基給細胞換液。

細胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細胞，當(dāng)細胞融合度超過80%時，即可傳代培養(yǎng)；

2.37℃水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺中，棄掉T-25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化細胞；

4.在顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，即可加入5ml*培養(yǎng)基終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打?qū)⒓毎瞪ⅲ?/span>

6.將細胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

7.棄上清，加入15-20ml的*培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T-75細胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例接種到T-25細胞培養(yǎng)瓶中（確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間），細胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布；

8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

9.每兩天用新鮮、預(yù)熱的*培養(yǎng)基進行換液。

細胞凍存

細胞凍存可用百恩維的“無DMSO無動物源細胞凍存液”，具體操作如下。

1. 細胞消化和計數(shù)，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數(shù)；

2. 1000rpm離心5分鐘，去掉上清；

3. 根據(jù)細胞計數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細胞密度在1×10⁶/ml左右（或根據(jù)自己希望達到的細胞密度）；

4. 輕輕地重懸細胞（務(wù)必重懸均勻），將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋；

5. 將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃；

6. 第二天將細胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。

注：如客戶用自己配制的凍存液凍存細胞，請避免用甘油作為保護劑。