文章標題：

Development of an Innovative 3D Cell Culture System to Study Tumour - Stroma Interactions in Non-Small Cell Lung Cancer Cells

采用創(chuàng)新的三維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)，研究非小細胞肺癌細胞與間質(zhì)細胞的相互作用

介紹：使用新穎的三維（3D）共培養(yǎng)模型----Insphero AG研發(fā)的GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)（GravityPLUS 3D cell culture platform), 研究非小細胞肺癌(NSCLC) 細胞系和肺成纖維細胞的共培養(yǎng)。使用GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)可以研究腫瘤-間質(zhì)間的相互作用，是更接近于體內(nèi)的細胞培養(yǎng)模型。

方法：使用多孔懸滴微量培養(yǎng)板（GravityPLUS 3D cell culture platform），研究單細胞的3D培養(yǎng)和多細胞的3D共培養(yǎng)。在懸滴培養(yǎng)板中，研究NSCLC細胞系之 A549細胞的單獨培養(yǎng)、NSCLC細胞系之 Colo699細胞的單獨培養(yǎng)、A549與肺成纖維細胞的共培養(yǎng)、和Colo699與肺成纖維細胞的共培養(yǎng)。腫瘤微球體形成并穩(wěn)定后（培養(yǎng)5天和10天后），使用Annexin V/Propidium Iodide（膜聯(lián)蛋白V/碘化丙啶）對微球體染色并用流式觀測；腫瘤成纖維細胞微球體形成后用電鏡（SEM）、熒光顯微鏡、半薄切片和免疫組化（IHC）觀測；除了這些常規(guī)組織學檢測，還用免疫組化的方法檢測鈣粘素、波形蛋白、腫瘤增殖抗原Ki67、纖連蛋白、角蛋白7和平滑肌肌動蛋白(a-SMA)的表達量。

結(jié)果：A549單細胞微球體與A549與成纖維細胞培養(yǎng)共培養(yǎng)的微球體相比，生存能力要差一些；而Colo699微球體的生存能力要比Colo699共培養(yǎng)的強。 ki67的表達量在單細胞培養(yǎng)和共培養(yǎng)也存在很大的差異。波形蛋白表達量的增加和鈣粘素表達量的減少都能被監(jiān)測到，表明三維培養(yǎng)過程中存在間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)變。除此之外，只有成纖維細胞系與A549細胞系共培養(yǎng)的時候，才有表達a-SMA，從而表明一種間質(zhì)狀態(tài)向另一種間質(zhì)狀態(tài)轉(zhuǎn)換。

結(jié)論：證明GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)（GravityPLUS 3D cell culture platform)是研究腫瘤微球體共培養(yǎng)的很有利的工具。而且，這些微球體可以進一步探討腫瘤與間充質(zhì)間的相互作用，可以更好的反映出腫瘤細胞在體內(nèi)微環(huán)境的狀態(tài)。Insphero開發(fā)的GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)將會為研發(fā)抗癌劑及尋找生物標記物做出一些貢獻。

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