綿羊降鈣素基因相關肽(CGRP)elisa試劑盒操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

48 ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

24 ng/L 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

12 ng/L 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

6 ng/L 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

3 ng/L 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

綿羊降鈣素基因相關肽(CGRP)elisa試劑盒原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中綿羊降鈣素基因相關肽(CGRP)水平。用純化的綿羊降鈣素基因相關肽(CGRP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素基因相關肽(CGRP)，再與 HRP 標記的降鈣素基因相關肽(CGRP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關肽(CGRP)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中綿羊降鈣素基因相關肽(CGRP)濃度。