人脂肪間充質干細胞的基本培養方法

復蘇：

1. 將人脂肪間充質干細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。
2. 將凍存管內細胞懸液轉移至含3-4 ml 人間充質干細胞（hMSC）*培養液的15 ml離心管內，以1000 rpm，離心5 min。
3. 離心后將上清液吸除，另加入新鮮的人間充質干細胞*培養液2 ml，吹打懸浮。
4. 輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。
5. 按照人脂肪間充質干細胞說明書中建議復蘇培養體系轉移至一個T25培養瓶中培養，加入培養液6 ml。
6. 放入37℃培養箱內培養。
7. 復蘇第二天觀察，如死細胞較多，更換新鮮的人間充質干細胞*培養液，可以使細胞生長的更好。

傳代： 
備注1：由于人間充質干細胞*培養液是低血清培養液，需要提前取少量人間充質干細胞*培養液，額外加入10% FBS，作為胰酶消化終止液使用。 
備注2：細胞不能太密集，否則容易分化。 

1. 待細胞長到70%-80%滿時進行傳代（見備注2），一般3-5天，具體視細胞生長情況而定。
2. 吸除廢液。
3. 用PBS（不含鈣鎂離子）輕輕沖洗一遍。
4. 加入1-2 ml的0.05% 胰酶（含EDTA）至培養瓶，輕輕晃動，使胰酶覆蓋底面，置于37℃培養箱內消化細胞。
5. 在顯微鏡下觀察，直至細胞層全部脫落（一般需要1-2 min）。
6. 加2 ml 胰酶消化終止液（即備注1中：額外加入10% FBS的人間充質干細胞*培養液）終止消化。
7. 1000 rpm離心5 min，去上清，加入人間充質干細胞*培養液2 ml。
8. 多次輕輕吹打細胞，制成單細胞懸液。
9. 按照1:2-1:3的比例進行傳代。
10. 放入37℃培養箱內培養。

凍存：

1. 按傳代的方法將細胞消化下來，制成細胞懸液。
2. 以1000 rpm，離心5 min，棄上清，逐滴加入已經預冷的凍存液，懸浮細胞。
3. 按每支凍存管內加入500 ml細胞懸液分裝到凍存管內，標記細胞名稱、代數、凍存日期等基本信息。
4. 將凍存管置于程序降溫盒內，-80℃過一夜，轉入液氮。

凍存液配方： 
人間充質干細胞*培養液60%，FBS 30%，DMSO 10%