凋亡試劑盒使用9大注意事項
1. 進行PBS 清洗時,每次清洗5分鐘左右。
2. PBS清洗后,為了各種反應的有效進行,請盡量除去PBS 溶液后再進行下一步反應。
3. 在載玻片上的樣本上加上實驗用反應液后,請蓋上蓋玻片或保鮮膜,或在濕盒中進行,這樣可以使反應液均勻分布于樣本整體,又可以防止反應液干燥造成實驗失敗。
4. TUNEL反應液臨用前配制,短時間在冰上保存。不宜長期保存,長期保存會導酶活性的失活。
5. 如果20×DAB 溶液顏色變深成為紫色,則不可使用,需重新配制。
6. 用甲基綠(Methyl Green)染液(3-5%甲基綠溶于0.1M 醋酸巴比妥 PH4.0)染色后,請用滅菌蒸餾水清洗多余的甲基綠。然后進行洗凈(100%乙醇)、脫水(二甲苯)透明、封片后通過光學顯微鏡觀察操作。如果此時使用80~90%的乙醇洗凈時,甲基綠比較容易脫色,注意快速進行脫水操作。
7. 熒光素標記的dUTP液含甲次*酸鹽和二氯鈷等致癌物,可通過吸入、口服等途徑進入機體,注意防護。
8. 試劑保存;未打開的試劑盒貯存在-20℃(-15~25℃);converter -POD液一旦解凍,凋亡試劑盒以后就保存在4℃(2~8℃)下,至少在6 m內穩定,避免再次凍存;TUNEL反應液臨用前配好后,放至冰上直至使用。
9. 結果分析時注意:在壞死的晚期階段或在高度增殖/代謝的組織細胞中可產生大量DNA斷裂,從而引起假陽性結果;而有些類型的凋亡性細胞死亡缺乏DNA斷裂或DNA裂解不*,凋亡試劑盒以及細胞外的矩陣成分阻止TdT進入胞內反應,進而產生假陰性結果。
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