臺(tái)盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測(cè)細(xì)胞是否存活。

臺(tái)盼藍(lán)染色法的原理

正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)；而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡(jiǎn)便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺(tái)盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較的定量。

臺(tái)盼藍(lán)染色法的操作步驟

材料：

1、顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管；

2、試劑：0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液；

3、臺(tái)盼藍(lán)（Trypan blue）：0.4g；

4、生理鹽水：100ml；

操作步驟：

1、用Hanks液配制0.1%臺(tái)盼藍(lán)溶液；

2、用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞；

3、再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液；

4、將待染色細(xì)胞稀釋所需濃度（方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同）；

5、每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴，室溫下染3—5min；

6、染色過的細(xì)胞材料，取一滴細(xì)胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放高倍鏡下觀察；

7、死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤。活細(xì)胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤；

8、計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目；

9、統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞。可按公式計(jì)算出細(xì)胞活率。

（細(xì)胞活率（%）=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100。）

臺(tái)盼藍(lán)染色法注意事項(xiàng)：

1、染色時(shí)間不能太長(zhǎng)，否則活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色，使監(jiān)測(cè)結(jié)果偏低。

2、另可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)。

3、有潛在致癌危險(xiǎn)，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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