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薄層層析可以對物質成分進行定性和定量測定。
定性分析——根據日光或紫外光，不同成分的不同顯色，判定物質的組成成分。
定量分析——洗脫法測定成分含量或薄層掃描法測定含量。
一、薄層層析定性檢測
1）物理方法：主要紫外燈下檢測，利用物質在254、365nm這兩個單色光下產生不同顏色不同強度熒光來檢測或利用在該光下不產生熒光而在熒光板上成為暗斑的方式檢測。
2）化學方法：主要指顯色劑顯色法：顯色劑分通用型和專屬型。通用型能廣泛的與不同類型化合物反應。專屬型對某類化合物，共有某種功能基化合物起反應。常見通用型顯色劑有碳化試劑（含不同濃度的酸）、磷鉬酸、三氯化銻、還有水。專屬型顯色劑，較多、復雜、具體物質可照藥典操作及查閱有關文獻資料。
3）生物方式：將某些特定細菌的凝膠混懸液倒在展開后的薄層板上，用適當溫度培養一段時間，以此檢測某些具有抑菌或殺菌的活性物質。
二、薄層層析定量測定
1）斑點刮取定量：
刮取隨行對照品同位置供試品的斑點，用適當溶媒提取后，用紫外分光法、氣相法、原子吸收分光光度等色譜手段測定。
2）直接定量：
a比斑點面積：用每格1mm2透明格紙蓋在薄層板上測量斑點所占面積mm2與對照品相互比較，定量誤差在10-20之間。
b薄層掃描法：實際工作原則是：用一束長寬可以調節的一定波長一定強度的光，照射在薄層板斑點上，進行掃描，用儀器測量通過斑點的光束強度的變化，從而達到定量的目的。
測定方式分類：反射法：測量反射光的強度。
透射法：測量透射光的強度。
掃描方式分類：單波長法、單光束法；單波長、雙光束法；雙波長法。
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