母種培養(yǎng)基的配制

　　1.器具：試管 刀 天平 鋁鍋 棉塞 紗布 漏斗 燒杯 量筒

　　2.常用的母種培養(yǎng)基配方

　　①馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)：馬鈴薯(去皮)200g，葡萄糖20g。瓊脂20g，水1000ml，{如果需要配制250ml的培養(yǎng)基，那么馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的比例是50:5:5}，也可用蔗糖取代葡萄糖，即為PSA培養(yǎng)基。還可以添加磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，維生素B1 10㎎，即為馬鈴薯綜合培養(yǎng)基。廣泛適用于各種食用菌母種的分離，培養(yǎng)和保藏。

　　②馬鈴薯玉米粉培養(yǎng)基：馬鈴薯(去皮)200g，蔗糖20g，玉米粉50g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，水1000ml。本配方適合于香菇、黑木耳、猴頭菌的培養(yǎng)。

　　③馬鈴薯黃豆粉培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂20g，黃豆粉20g，碳酸鈣10g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，水1000ml。適用于蘑菇、草菇。

　　④葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨20g，瓊脂20g，水1000ml。

　　⑤蛋白胨、酵母、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨2g，酵母膏2g，硫酸鎂0.5g，磷酸二氫鉀0.5g，磷酸氫二鉀1g，葡萄糖20g，維生素B1 20㎎，瓊脂20g，水1000ml。

　　具體步驟

　　1.計(jì)算。按照選定的培養(yǎng)基配方，計(jì)算各種成分的用量。

　　2.稱量。用天平秤取各種物質(zhì)，馬鈴薯去皮去芽眼，削掉青綠部分，對不易稱量的成分，可用玻棒和燒杯稱重，微量元素等需要量少，難以稱準(zhǔn)時(shí)，可先配成較濃的原液，再從中取出需要的量。

　　3.配制。若配制合成培養(yǎng)基，先量取蒸餾水，加入瓊脂，加熱溶化;再加入稱好的其他物質(zhì)。為避免發(fā)生沉淀造成營養(yǎng)損失，加入的順序一般是先加緩沖劑，再依次加入主要元素、微量元素和維生素等;若各種成分均不發(fā)生沉淀，也可一起加入。

　　4.煮汁，去濾液。馬鈴薯切成1㎝見方的小塊或2~3㎜厚的薄片，加水約1200ml煮沸，再用文火保持20~30分鐘、并適當(dāng)攪拌，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)充分溶解出來，然后用4層預(yù)濕的紗布過濾，取其濾液。

　　5.補(bǔ)足水量，加藥品溶化。補(bǔ)足水量至1000ml，然后往濾液中加入瓊脂，小火加熱，攪拌至瓊脂溶解，再加入葡萄糖和其他營養(yǎng)物質(zhì)使其溶化后，用PH試紙檢測其PH值，可根據(jù)需要使用氫氧化鈉和鹽酸，調(diào)整適宜的酸堿度，進(jìn)行分裝。注意開鍋攪拌，防止溢出或焦底。

　　6.分裝試管。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)趁熱分裝，可用玻璃試管，先把較大的玻璃漏斗固定在滴定架上，下接一段乳膠管和玻璃管，用彈簧夾夾住膠管。手拿試管，分裝量掌握在試管長度的四分之一。注意分裝時(shí)，培養(yǎng)基不能粘在試管口壁上，否則會(huì)污染棉塞。

　　7.賽棉塞，注意要松緊適度。

　　8.高壓鍋滅菌30分鐘。

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