堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)

產品簡介：

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內，其活性所需zui適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之內皮，還見于內質網、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。

堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者與偶聯重氮鹽生成有產物，定位于細胞質中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。

產品組成：

自備材料：

1、載玻片、濕盒

2、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

(一)、涂片或切片

1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定)，水洗。

2、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，水洗。

3、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3～5min。

4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。

(二)貼壁培養細胞

1、取6孔板或其他容器培養的細胞，棄液，PBS清洗干凈。

2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。

4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染3～5min。

5、PBS 清洗、鏡檢。

染色結果：

血液、骨髓涂片結果判斷：

一般以積分報告結果，根據 100 個中性粒細胞陽性顆粒進行 0～4+計分。

臨床意義：

1、類白血病反應積分明顯增高，未經治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。

2、急性細菌感染積分明顯增高，病毒感染積分多正常或減低。

3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS積分常減低。

注意事項：

1、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮，薄厚適宜，及時固定，否則會影響酶的活性。

2、培養細胞染色操作過程中，清洗、染色等步驟都應輕微，以免損傷或丟失細胞。

3、ALP孵育液易失效或降低陽性強度，即配即用，不宜久置。

4、復染時，核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。

5、每次染色時，應有陽性對照片。

有效期：6個月有效。