背景

革蘭氏陰性菌（GNB）給全球公共衛生造成了最嚴重的問題之一，因為這種細菌對抗生素有高度耐藥性1，而且會引發肺炎、血液感染、傷口和手術部位感染、腦膜炎等感染性疾病2。細菌內毒素是GNB細胞膜的關鍵成分，當濃度足夠高時會引發致熱反應（即高燒）。美國食品藥品監督管理局（FDA）要求制藥廠進行細菌內毒素檢測（BET，Bacterial Endotoxins Testing），重點測量注射用水（WFI，Water For Injection）、制藥原材料、成品藥、醫療器械等所有涉及注射用藥物的GNB污染程度。細菌內毒素的檢測方法主要有以下3種：1.凝膠法（Gel-Clot），2.動態濁度法（KTA，Kinetic Turbidimetric Assay），3.動態顯色法（KCA，Kinetic Chromogenic Assay）。

鱟試劑（LAL，Limulus Amebocyte Lysate）提取自鱟的血液，用于細菌內毒素檢測。當檢測到內毒素時，鱟試劑級聯就會有一系列酶促反應，酶促反應會放大內毒素的顯現。當內毒素與鱟試劑反應時，內毒素會激活酶級聯中的第一個因子——C因子，然后C因子會激活B因子。B因子會作用于凝固酶原，使其成為凝固酶。最后的檢測步驟就是凝固（用凝膠法）、濁度（用動態濁度法）或顯色（用動態顯色法）。

Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀

Eclipse檢測儀由以下3部分組成：儀器、微流控微孔板、軟件。儀器是一臺吸光度分析儀，具有37°C恒溫培養控制和離心技術。微孔板內預置了細菌內毒素參考標準品（RSE，Reference Standard Endotoxin）和陽性產品對照（PPC，Positive Product Controls），允許用戶在每次化驗時運行最多5點標準曲線（濃度為50-0.005 EU/mL），以及最多21個樣品及陰性和陽性對照。Eclipse軟件操作簡便，符合《聯邦法規21章》第11款（21 CFR Part 11）的規定。

目的和范圍

鱟試劑（LAL）化驗易受干擾。樣品中可能含有抑制或增強內毒素檢測的物質，因此產生假性結果。需要對待測樣品進行方法適用性測試和抑制/增強測試，以確定克服上述干擾所需的稀釋倍數（或其它有效方法）。

本應用文獻概述了如何進行抑制/增強測試，如何運行此測試來證明Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀的適用性，以及提供運行樣品的方法適用性。方法信息包括：所用的鱟試劑化驗方法、化驗靈敏度（λ）、驗證的稀釋倍數、PPC（陽性產品對照）加標濃度、稀釋劑、%CV（變異系數）標準、以及平均PPC回收率。

樣品信息包括：樣品濃度（單位為mg/mL）、內毒素限值（EL，Endotoxin Limit；單位為EU/mL）、最大有效稀釋倍數（MVD，Maximum Valid Dilution）、最小有效濃度（MVC，Minimum Valid Concentration）、平均樣品結果（單位為EU/mL）、以及樣品儲存/處理條件。

Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀：高效便捷的解決方案

Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀可以高效運行抑制/增強測試，以及上述3批次產品驗證程序。此款檢測儀采用先進的離心技術和動態方法，簡化了內毒素檢測流程。上述優點使得此款檢測儀能夠更快、更精確地報告檢測結果，并提供準確的定量分析和干擾分析。

Sievers Eclipse檢測儀的優點還包括：

•高效：自動化功能減少了化驗設置和移液的操作步驟，提高了通量。

•直觀：直觀的用戶界面簡化了操作步驟，減少了錯誤，提高了數據質量。

•合規性：此款檢測儀滿足有關藥典測試和數據可靠性的嚴格法規要求。

Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀是細菌內毒素檢測領域的一項重大的技術進步，為持續進行的產品驗證需求提供了全面、高效、合規的解決方案，提高了產品的安全性和質量。

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