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上海聯碩生物科技有限公司
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DAB染色試劑盒(藍)使用說明2012/07/19
DAB染色試劑盒(藍)使用說明DABKIT(blue)貨號:Kit-DAB-1二氨基聯苯胺(DAB)是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產品采用特殊配方,靈敏度高,背景低,儲存穩定,使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學和免疫細胞化學、斑點印跡和生物芯片等的染色和顯色反應。包裝試劑規格A液2ml(20X)B液2ml(20X)C液2ml(20X)用法使用前計算本次實驗需要的量(50-100ul每張切片),按1ml蒸餾水加A液,B液和C液各
DAB KIT (yellow)2012/07/19
DAB染色試劑盒(黃)使用說明DABKIT(yellow)貨號:Kit-DAB-2二氨基聯苯胺(DAB)是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產品采用特殊配方,靈敏度高,背景低,儲存穩定,使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學和免疫細胞化學、斑點印跡和生物芯片等的染色和顯色反應。包裝試劑規格A液2ml(20X)B液2ml(20X)C液2ml(20X)用法使用前計算本次實驗需要的量(50-100ul每張切片),按1ml蒸餾水加A液,B液和C
ELISA 技術中的抗原與抗體的反應 ELISA2012/07/19
上海聯碩生物科技有限公司ELISA技術中的抗原與抗體的反應抗體1.抗體的結構抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結構不同,這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基
ELISA(EIA)酶結合物的制備2012/07/19
酶結合物的制備免疫酶技術(immunoenzymatictechnique)又稱酶免疫測定法(enzymeimmunoassay,EIA),是繼免疫熒光技術和放射免疫技術之后發展起來的又一種免疫標記技術。它是把抗原抗體的特異性反應和酶的催化作用相結合而建立的。該技術通過化學方法將酶與抗體或抗抗體結合,形成酶標記物,這些酶標記物仍保持免疫學活性和酶的活性,然后將它與相應的抗體或抗原起反應,形成酶標記復合物,結合在免疫復合物上的酶,在遇到相應的底物時,則催化底物產生水解、氧化或還原等反應,而生成可溶
ELISA標本收集處理方法2012/07/19
標本的收集與保存(上海聯碩生物科技有限公司,國內免疫學產品主要供應商之一)臨床檢驗常見的標本一般包括血液(指血,靜脈血),尿,糞便,腦脊液,胸腹水,前列腺液,精液,陰道分泌物等,這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。一、血液標本有些生理因素,如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化,有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾,以條件一致為宜,如無法避免,應在標本上注明該因素。1.外周血一般選取左手無名指內側采血,該部位應無凍瘡,炎癥,水腫
ELISA標準操作及技術服務的常見問題分析 ELISA2012/07/19
一.ELISA標準操作要點的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。1.標本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會
ELISA材料和方法(檢測豬流行性腹瀉病毒抗體)2012/07/19
ELISA材料和方法(檢測豬流行性腹瀉病毒抗體)1材料(1)聚苯乙烯塑料微量組織培養板:4×10孔,上海塑料三廠生產。(2)包被液(pH值96):NaHCO3293g、Na2CO3195g,蒸餾水加至1000ml,置4℃保存。(3)洗滌液(001mol/L、pH值74PBS):NaCl80g、KH2PO402g、Na2HPO4?12H2O29g、KCl02g、Tween2005ml,加蒸餾水至1000ml。(4)保溫液:牛血清白蛋白(BSA)01g、005%PBSTween20100ml,4℃保
ELISA測定操作規程2012/07/19
(ELISA測定操作規程(以小鼠TNF-a為例)一、原理與意義通過抗原和抗體在體外特異結合后出現的各種現象,對樣品中的抗原或抗體進行定性和定量檢測。本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的TNF-a與單抗結合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin)與生物素結合,加入酶底物鄰苯二胺(OPD),出現黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測OD值,TNF-a
ELISA常見問題2012/07/19
ELISA常見問題ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:①標本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1.樣品稀釋酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以
125I標記物的純化2012/07/19
125I標記物的純化125I標記物反應后,標記物需進行分離純化以除去游離125I-和其他雜質。純化標記物的方法有利用分子篩機制的凝膠過濾法、利用游離125I-與標記物分子極性差異進行吸附解離的離子交換層析法、按分子所帶電荷和直徑不同在電場作用下分子遷移速率不同進行分離純化的聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)以及液相色譜法(HPLC)。以葡聚糖凝膠(如SephadexG-50)柱層析分離純化125I標記物為例:標記反應混合液經柱層析時,需定時或定量逐管收集層析洗脫液,并用丁計數儀測定每管的放射性強度
125I標記物的鑒定2012/07/19
標記物的鑒定1.放射化學純度是指單位標記物中結合于被標記物上的放射性占總放射性的百分率,一般要求大于95%。常用的測定方法是利用三氯醋酸將待測樣品中(預加白蛋白助沉淀)所有蛋白質沉淀,離心后測定沉淀物(標記物)的放射性并計算其占待測樣品總放射性的百分率。該項參數還是觀察在貯存期內標記物脫碘程度的重要指標。2.免疫活性(immunoreactivity)指制備的標記物與抗體結合的能力。它反映標記過程中被標記物免疫活性受損情況。測定方法是用少量的標記物與過量抗體反應,然后測定標記物與抗體結合部分的放
DAB-12012/07/19
DAB染色試劑盒(藍)使用說明DABKIT(blue)貨號:Kit-DAB-1二氨基聯苯胺(DAB)是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產品采用特殊配方,靈敏度高,背景低,儲存穩定,使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學和免疫細胞化學、斑點印跡和生物芯片等的染色和顯色反應。包裝試劑規格A液2ml(20X)B液2ml(20X)C液2ml(20X)用法使用前計算本次實驗需要的量(50-100ul每張切片),按1ml蒸餾水加A液,B液和C液各
DAB-22012/07/19
DAB染色試劑盒(黃)使用說明DABKIT(yellow)貨號:Kit-DAB-2二氨基聯苯胺(DAB)是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產品采用特殊配方,靈敏度高,背景低,儲存穩定,使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學和免疫細胞化學、斑點印跡和生物芯片等的染色和顯色反應。包裝試劑規格A液2ml(20X)B液2ml(20X)C液2ml(20X)用法使用前計算本次實驗需要的量(50-100ul每張切片),按1ml蒸餾水加A液,B液和C
DAB KIT2012/07/19
DAB染色試劑盒(藍)使用說明DABKIT(blue)貨號:Kit-DAB-1二氨基聯苯胺(DAB)是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產品采用特殊配方,靈敏度高,背景低,儲存穩定,使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學和免疫細胞化學、斑點印跡和生物芯片等的染色和顯色反應。包裝試劑規格A液2ml(20X)B液2ml(20X)C液2ml(20X)用法使用前計算本次實驗需要的量(50-100ul每張切片),按1ml蒸餾水加A液,B液和C液各
ELISA 標準操作及技術服務的常見問題分析2012/07/19
一.ELISA標準操作要點的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。1.標本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會
ELISA 材料和方法(檢測豬流行性腹瀉病毒抗體)2012/07/19
ELISA材料和方法(檢測豬流行性腹瀉病毒抗體)1材料(1)聚苯乙烯塑料微量組織培養板:4×10孔,上海塑料三廠生產。(2)包被液(pH值96):NaHCO3293g、Na2CO3195g,蒸餾水加至1000ml,置4℃保存。(3)洗滌液(001mol/L、pH值74PBS):NaCl80g、KH2PO402g、Na2HPO4?12H2O29g、KCl02g、Tween2005ml,加蒸餾水至1000ml。(4)保溫液:牛血清白蛋白(BSA)01g、005%PBSTween20100ml,4℃保
ELISA 測定操作規程2012/07/19
(ELISA測定操作規程(以小鼠TNF-a為例)一、原理與意義通過抗原和抗體在體外特異結合后出現的各種現象,對樣品中的抗原或抗體進行定性和定量檢測。本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的TNF-a與單抗結合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin)與生物素結合,加入酶底物鄰苯二胺(OPD),出現黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測OD值,TNF-a
ELISA中非特異性顯色原因分析2012/07/19
影響ELISA中非特異性顯色的原因很多,如試劑盒特異性、檢驗標本中含酶標記物的干擾物,操作過程中的問題。本文就這一原因作一簡要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度,從而提高檢測的特異性,并得到更準確、可靠的實驗結果?!娟P鍵詞】ELISA非特異性顯色酶聯免疫吸附試驗(ELISA)自1971年自問世以來,以其敏感性高,特異性強,操作簡便、安全,而廣泛應用于臨床診斷,開創了免疫學診斷的新紀元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產及使用中常常會碰到非特異性問題,本文就在實驗
ELISA原理與分類2012/07/19
ELISA的原理ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定傷寒桿菌“O”抗體2012/07/19
酶聯免疫吸附試驗是用酶標記的抗體(或SPA)檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高,特異性強。常用的是ELISA方法,間接法,雙抗體法和抗原法。本次試驗介紹,酶聯葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下,見圖91.加抗原使之吸附于固相載體(如塑料反應板)2.洗滌加待測血清3.洗滌加酶標記SpA4.洗滌加酶的底物。經酶的催化產生有色產物。材料:1.聚乙烯塑料反應板(PH9.6時可吸附蛋白Ag)2.抗原:傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原3.待測血清4.凍干酶聯葡萄球菌A蛋白(HRD—pro
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