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淺談培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中的幾種試劑2022/12/19: 細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。在培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中有有幾種試劑是經(jīng)常用到的。1、高糖DMEM溶液用新配制的三蒸水配制，高糖DMEM干粉（規(guī)格10×1L），溶入約總量的1/3的三蒸水，并用水洗凈包裝袋，在磁力攪拌器上攪拌30分鐘，加入NaHCO23.75克，補(bǔ)加水至最終量。用1NHCL調(diào)整PH為7.2，0.22μm濾膜抽濾除菌，分裝-20℃保存，使用時(shí)加10%的胎牛血清及雙抗溶液（最終濃度：青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml）2、胎牛血清使用前56℃水浴30

血清保存需把控的要點(diǎn)2022/12/13: 血清是血液從體內(nèi)取出后發(fā)生凝血后的上層澄清液體,凝血的主要反應(yīng)是纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,所以血清中不再含有纖維蛋白原。血清保存需把控的要點(diǎn)：1、需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月.由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已wan全解凍的血清.加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必

淺談細(xì)胞轉(zhuǎn)染的途徑2022/12/06: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類(lèi)：1、物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。2、化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。3、生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)

抗體的特異性的四個(gè)方面表現(xiàn)2022/11/25: 抗體(antibody)免疫細(xì)胞分泌免疫物質(zhì)，是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過(guò)介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來(lái)清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等。特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connectedwithoneparticularthingonly"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專(zhuān)一性

抗體IgG生理特性具體講述2022/11/14: 抗體又被稱(chēng)為免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig），這是因?yàn)椋宓鞍淄ㄟ^(guò)物理的溶解度定義，可以被簡(jiǎn)單的區(qū)分為白蛋白（albumin）和球蛋白(globulin)，進(jìn)一步通過(guò)電泳技術(shù)對(duì)血清蛋白進(jìn)行精確的分析，發(fā)現(xiàn)大部分的抗體蛋白都集中在伽馬球蛋白（gammaglobulin）所在的條帶，因此抗體也被稱(chēng)為免疫球蛋白。作為一種功能蛋白，抗體整體由四條多肽鏈構(gòu)成，分別為兩條結(jié)構(gòu)相同的輕鏈（Lchain）和兩條結(jié)構(gòu)相同的重鏈（Hchain），四條鏈形成典型的“Y”型抗體結(jié)構(gòu)。氨基酸序列比較研究

詳述ELISA常見(jiàn)四個(gè)問(wèn)題與解決方法2022/11/07: ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是一類(lèi)常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定待測(cè)物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測(cè)物濃度。下面詳述ELISA常見(jiàn)四個(gè)問(wèn)題與解決方法:1.陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果①樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染——更換試劑，小心操作。②酶標(biāo)板洗滌不徹di——洗板前先將抗體溶液倒干凈，然后清洗液倒?jié)M板孔，確保能充分洗滌。③抗體量過(guò)多導(dǎo)致非

加大環(huán)保技術(shù)投資促進(jìn)跨國(guó)公司參與可持續(xù)發(fā)展2022/11/01: 加大環(huán)保技術(shù)投資促進(jìn)跨國(guó)公司參與可持續(xù)發(fā)展導(dǎo)讀：據(jù)了解，“十二五”期間，將以六個(gè)方面的問(wèn)題為重點(diǎn)進(jìn)行投資和戰(zhàn)略布局，包括飲水安全、空氣污染、重金屬污染、土壤污染、農(nóng)村生態(tài)整治和環(huán)保集成能力建設(shè)。相關(guān)人士分析，環(huán)保技術(shù)、裝備和服務(wù)等多個(gè)環(huán)節(jié)的綜合能力，將在“十二五”期間獲得大幅提升。他表示，隨著國(guó)內(nèi)環(huán)保裝備業(yè)自主化率的提升，企業(yè)將能減少設(shè)備引進(jìn)成本，**市場(chǎng)主動(dòng)權(quán)。中國(guó)政府對(duì)環(huán)境保護(hù)、節(jié)能減排、循環(huán)經(jīng)濟(jì)的日益重視正推動(dòng)經(jīng)濟(jì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)型，也正創(chuàng)出造越來(lái)越多的新商機(jī)。包括福伊特在內(nèi)的許多大型跨國(guó)公司重視

ELISA實(shí)驗(yàn)各類(lèi)組織勻漿樣本的處理說(shuō)明2022/11/01: ELISA實(shí)驗(yàn)中的各類(lèi)組織勻漿有容易勻漿的組織和不易勻漿的組織的兩類(lèi)樣本，下面分別介紹它們的采集、處理和保存。一、應(yīng)用ELISA實(shí)驗(yàn)的各類(lèi)組織勻漿（容易勻漿的組織）樣本的采集、處理和保存。1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱(chēng)重，剔除附屬的結(jié)締組織，稱(chēng)取組織塊。2、用移液管量取0.1MPBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。3、勻漿的方式有多種

論述ELISA常見(jiàn)檢測(cè)方法2022/10/24: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。ELISA的檢測(cè)方法有直接發(fā)、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法基雙抗夾心法四

PCR反應(yīng)中溫度的設(shè)置2022/10/17: 在PCR自動(dòng)熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增片段500bp。在這里，每一步的時(shí)間應(yīng)從反應(yīng)混合液達(dá)到所要求的溫度后開(kāi)始計(jì)算。在自動(dòng)熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時(shí)間需要30～60s，這一遲滯時(shí)間的長(zhǎng)短取決于幾個(gè)因素，包括反應(yīng)管類(lèi)型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加熱塊)以及兩步驟間的溫度差，在設(shè)置熱循環(huán)時(shí)應(yīng)充分給以重視和考慮，對(duì)每一儀器均應(yīng)進(jìn)行實(shí)測(cè)。關(guān)于熱循環(huán)時(shí)間

探討影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果洗板操作2022/10/10: 在做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，洗板有兩種方法：手工法洗板和洗板機(jī)洗板。二者沒(méi)有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結(jié)果。手工洗板是每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)液吸出或甩干,然后在板孔中加滿(mǎn)洗液,放置2～3min后,將洗液吸出或甩干再在吸水紙上拍干。重復(fù)上述洗滌步驟3～4次,最后在吸水紙上拍干即可。手工洗板人為因素比較大,實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)驗(yàn)豐富,洗滌次數(shù)要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿(mǎn)反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時(shí)防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成

探討抗體的分裝與保存2022/10/08: 抗體（antibody）是指機(jī)體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護(hù)作用的蛋白質(zhì)。它（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來(lái)鑒別與中和外來(lái)物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體能識(shí)別特定外來(lái)物的一個(gè)*特征，該外來(lái)目標(biāo)被稱(chēng)為抗原。抗體的分裝與保存:抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。1.收到抗體后請(qǐng)?jiān)?2000rpm離心1-5min，將

冷凍細(xì)胞活化的正確操作步驟2022/09/26: 細(xì)胞冷凍yellfreexirig是保存微生物或動(dòng)植物細(xì)胞株的常用方法。冷凍細(xì)胞到底該如何活化，一個(gè)不小心，細(xì)胞就受損了，今日總結(jié)，冷凍細(xì)胞活化的正確操作步驟:1.冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。2.細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。3.步驟：①操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易

抗體的免疫學(xué)功能???????用途2022/09/19: 抗原進(jìn)入外環(huán)境，被吞噬細(xì)胞吞噬，露出特異性抗原。T細(xì)胞分泌淋巴因子，刺激B細(xì)胞，B細(xì)胞增殖分化，產(chǎn)生漿細(xì)胞，分泌抗體。有部分抗原直接刺激B細(xì)胞，B細(xì)胞增殖分化，產(chǎn)生漿細(xì)胞，分泌抗體。在二次免疫時(shí)，抗原直接刺激漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體。抗體是機(jī)體依據(jù)抗原而特異性產(chǎn)生的一種蛋白。抗體產(chǎn)生后的免疫學(xué)功能用途如下：1、特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷。然而，抗體可通過(guò)與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用

實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作要求2022/09/13: 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)操作要求一、無(wú)菌操作要求食品微生物實(shí)驗(yàn)室工作人員，必須有嚴(yán)格的無(wú)菌觀念，許多試驗(yàn)要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行，主要原因：一是防止試驗(yàn)操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當(dāng)造成個(gè)人污染。1．接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。2．進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專(zhuān)用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。3．接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?．進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使

ELISA測(cè)定標(biāo)本處理保存需考慮方面2022/09/05: 用于ELISA測(cè)定的標(biāo)本最為常用的是血清(漿)，有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可di松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值出現(xiàn)：生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測(cè)定此類(lèi)激素時(shí)，有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本

抗生素的特性與作用機(jī)理介紹2022/08/30: 抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細(xì)菌、真菌、放線菌屬）或高等動(dòng)植物在生活過(guò)程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類(lèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細(xì)胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)。現(xiàn)臨床常用的抗生素有轉(zhuǎn)基因工程菌培養(yǎng)液液中提取物以及用化學(xué)方法合成或半合成的化合物。抗生素是細(xì)菌、霉菌或其他微生物的代謝產(chǎn)物或人工合成的類(lèi)似物，通俗地講，抗生素就是用于治療各種細(xì)菌感染或抑制致病微生物感染的藥物。其主要用途是抑制其他種類(lèi)微生物的生長(zhǎng)（抑菌作用）或?qū)⑺鼈儦⑺溃⒕饔茫话闱闆r下對(duì)其宿主不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的

雜交瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)過(guò)程2022/08/22: 雜交瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)過(guò)程：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10

WB實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果背景過(guò)高原因分析2022/08/15: WesternBlot（WB）又名WesternBloting、Western、蛋白質(zhì)印跡法、免疫印跡試驗(yàn)，WesternBlot基本原理：首先利用SDS-PAGE對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分離，然后轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。轉(zhuǎn)移后的膜就稱(chēng)為一個(gè)印跡（blot）,用于對(duì)蛋白質(zhì)的進(jìn)一步檢測(cè)。印跡首先用蛋白溶液處理以封閉膜上剩余的疏水結(jié)合位點(diǎn)，而后用所要研究的蛋白質(zhì)的抗體（一抗）處理，印跡中只有待研究的蛋白質(zhì)與一抗特異結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合

提取到質(zhì)量良好的RNA方法技術(shù)2022/08/08: 提取到質(zhì)量良好的RNA（包括總RNA和mRNA，以下同），概括起來(lái)有兩種方法，總結(jié)如下：1、檢測(cè)RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時(shí)，我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的，不過(guò)要注意，當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R值可能會(huì)大于2（一般應(yīng)該是2.2時(shí)，說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。如果RNA的量夠，可在260nm

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