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ELISA實驗標準品正確溶解與稀釋2023/11/28

ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。標準品正確溶解：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。標準品梯度稀釋:1、標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養基梯度稀

ELISA試驗陰性與陽性對照平均值計算與判斷2023/11/20

陰性與陽性對照平均值計算與判斷：1．陰性對照平均值NCx有效性計算判斷舉例：（1）第一類NCx計算與評價：以HBsAg為例Ⅰ.設置3孔的NCx計算：NCx=（0.011+0.010+0.090）/3=0.010Ⅱ.任一個NC值應≤0.100至≥－0.010；Ⅲ.各NC值也應介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。此時各孔的NC值均處于NCx±0.006范圍內，其中遇有一孔NC值偏離該范圍時，則棄去該NC值，再計算NCx。如有2孔NC值超出該范圍時，本次試驗（無效）應予復試。Ⅳ.不同廠牌對NC

原代培養操作步驟與注意事項2023/11/13

原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環境，在無菌、適當溫度和一定的營養條件下，生存、生長和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學方面的試驗效果很好。操作步驟：1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附的結締組織等非培養所需組織。再次清洗后，用手術刀

ELISA實驗標準品溶解與稀釋介紹2023/11/06

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，而標準品是相對于具體的物質有具體的標準品，所以不存在說ELISA的標準品。ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。正確溶解、稀釋標準品如下：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋

小鼠ELISA檢測試劑盒實驗常見問題解答2023/10/30

小鼠ELISA檢測試劑盒實驗常見問題解答：1、問：小鼠ELISA檢測試劑盒后期數據處理中空白的OD值有什么作用？答：可以將標準品和樣本的OD值同時減去空白的值進行計算，或者都不減，保持同一水平就行。2、問：那我們算出來的ACH含量為什么出現負值？答：說明個別樣本的濃度很低,當濃度接近第6個點的時候,直線方程就有可能計算出負值。3、問：我兩個空白孔一個啥都不加，一個加了后面的A液，B液還有終止液,請問用哪一個？答:用加了A液，B液還有終止液的那個更加準確,因為樣本都加過這些，可以排除相應的干擾。4

PCR反應條件的控制與循環參數分析2023/10/23

PCR反應條件的控制：1.PCR反應的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應溫度（1）變性溫度和時間95℃，30s。（2）退火溫度和時間低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。（3）延伸溫度和時間72℃，1min/kb(10kb內）。（4）Tm值=4(G+C)+2(A+

細胞適應無血清培養基的方式分享2023/10/16

目前，血清仍是動物細胞培養中最基本的的添加物，尤其是在原代培養或者細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。細胞轉入無血清培養基培養要有一個適應過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養。在降低過程中要注意觀察細胞形態是否發生變化，是否有部分細胞死亡，存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續保留，很少有細胞能夠長期培養于無血清培養基而不發生改變的。細胞轉入無血清培養之前，要留有

化學實驗室固體與液體試劑取用規范操作2023/10/11

化學試劑按照形態的差異分為固體、液體、粉末、顆粒等不同種類，針對不同的試劑需要選用符合其特性的試劑瓶，所以試劑在取用時也會有所差別。在各類化學實驗、科研檢測過程中，正確、精準地取用固體樣品和液體樣品是保證數據結果準確的重要一步，所以，掌握藥品及試劑的取用、稱量和溶解就是非常必要的。一、固體試劑的取用規則1、要用干凈的藥匙取用。用過的藥匙必須洗凈和擦干后才能再使用，以免沾污試劑。2、取用試劑后立即蓋緊瓶蓋。3、稱量固體試劑時，必須注意不要取多，取多的藥品，不能倒回原瓶。二、液體試劑的取用規則為了防

ELISA標準品溶解稀釋操作要點2023/10/03

ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。標準品，即是標準物品，作為一種衡量標準，如果用在藥物方面，則為含量測定中的標準含量。正確溶解、稀釋標準品操作下面詳述：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末wan全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待wan全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標準品梯度稀釋:（1）標準品稀

蛋白質定量分析實驗詳解2023/09/22

蛋白質的定量分析主要依靠蛋白質本身的發色基團，或與其它顯色劑反應產生的紫外吸收來進行的。目前常用的蛋白質的定量主要有紫外線吸收法、Bradford法及BCA法等。實驗原理：BCA（bicinchoninicacid，二辛可酸）法測定蛋白的原理二價銅離子在堿性條件下可以被蛋白質還原成一價銅離子（biuretreaction），一價銅離子和du特的BCA溶液A（含有BCA）相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合一個銅離子，形成紫色的反應復合物。該水溶性的復合物在562nm處顯示強烈的吸光性，

細胞冷凍保存方法?及注意事項2023/09/11

冷凍保存方法：1、傳統方法:冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(或隔夜)---液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止胞內冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。2、程序降溫：利用已設定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。3、步驟：（1）冷凍前24-48小時

熊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒PCR反應的特異性探討2023/09/08

PCR反應的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結合；②堿基配對原則；③TaqDNA聚合酶合成反應的忠實性；④靶基因的特異性與保守性。1、其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高。2、靈敏度高PCR產物的生成量是以指數

ELISA試劑盒實驗包被過程詳解2023/08/28

在使用ELISA試劑盒進行實驗的時候，需要注意很多問題，比如溫育、顯色、包被等問題。其中，包被是要特別注意的一個問題，直接關系到實驗的效果。一、包被的方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。不易吸附的非蛋白質抗原可用間接包被的抗原經

PCR常見種類推薦2023/08/16

PCR的概念:PCR，即聚合酶鏈式反應（polymerasechainreaction，PCR），主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復的熱循環構成：即模板DNA先經高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互補序列發生退火，接著在DNA聚合酶的催化下以四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）為底物，使退火引物得以延伸，如此反復，使位于兩段已知序列之間的DNA丨片段呈幾何倍數擴增。PCR的分類:PCR有很多種，核心就是用引物擴增特定的DNA，以指數方式

探討載體保存微生物菌種方法2023/08/07

微生物菌種載體保存法，即將微生物吸附在適當載體上進行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種：1、土壤保存法主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風干、粉碎、過篩和滅菌。使微生物在土壤中繁殖后進行干燥保存的方法是：取適量土壤(5克)，置于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養基(以含水量為土壤大持水量的60%為宜)，然后高壓滅菌。再將需保存的

合成培養基的主要成分詳解2023/08/01

細胞培養基的種類很多，按其來源分為合成培養基和天然培養基（目前使用的培養基絕大部分是合成培養基），按其物質狀態分為干粉培養基和液體培養基兩類。干粉培養基需由實驗者自己配制并滅菌，液體培養基由專業商家提供，用戶可直接使用，非常方便。合成培養基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其它輔助物質。1、氨基酸氨基酸是組成蛋白質的基本單位。不同種類的細胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細胞自身不能合成，必須依靠培養液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨

胎牛血清給細胞提供的作用2023/07/24

胎牛血清是細胞培養中常用的添加培養基。它營養豐富，大約含有三四百種不同成分，具有基礎培養基所不具備的營養因子。它給細胞提供的益處主要有六個方面。1、提供細胞生長所需的天然激素或天然的生長因子。2、提供天然的結合蛋白，能識別氨基酸、脂質、金屬離子和激素等，能結合并調節它們的活性。已知清蛋白(albumin）即具有上述功能，并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白（Fetuin），具有多個鈣離子結合位點，因而能調節和維持血清中的鈣離子濃度。3、天然含有粘附蛋白等細

大腸桿菌概述及菌株的分型2023/07/17

大腸桿菌作為外源基因表達的宿主,遺傳背景清楚,技術操作簡單,培養條件簡單,大規模發酵經濟,倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應用zui廣泛,最成功的表達體系,常做高效表達的shou選體系。真核基因在大腸桿菌中表達,必須有合適的表達載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統。一、目的基因在大腸桿菌中表達的情況:大腸桿菌更適合原核基因的表達,外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的,而單位體積產量與細胞濃度和每個細胞平均表達產量呈正相相關.細胞濃度與生長速率,外源基因拷貝數和表達

單克隆抗體和多克隆抗體從多方面分析區別2023/07/10

抗體是我們實驗中zui常用到的一種物質之一，抗體主要是分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類，本文從定義、制備方式、性質特點及應用上的區別對單抗和多抗進行比較。一、定義上的區別機體受抗原刺激后，由淋巴系統的細胞(主要是B淋巴細胞分化后的漿細胞)產生具有特異性免疫功能球蛋白，即抗體。抗原物質上能刺激B淋巴細胞的結構部位叫做抗原決定簇，一個抗原具備多個抗原決定簇，只針對一個抗原決定簇起作用的漿細胞群就是一個純系，即一種克隆，由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。機體受到抗原的刺激往往會針對抗原的多個抗

ELISA方法的測定內容闡明2023/07/03

ELISA方法測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。1、酶與抗體的活性常用瓊脂擴散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線，經PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，如果出現應有的顏色反應，再用生理鹽水浸泡，顏色仍然不褪，表示結合物既有酶的活性，也有抗體活性。良好的結合物在顯色后，瓊擴滴度應在1:16以上。另一個測定方法是用系列稀釋的酶標抗體直接以ELISA方法進行方陣滴定，此法不僅可以測定標記效果，還可以確定酶標抗體的使