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Western Blot快速實驗攻略2018/05/23
一、WesternBlot實驗原理蛋白免疫印跡（WesternBlot，WB）是將蛋白質經電泳分離后轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的技術。完整的WB流程，如下圖所示，包含樣本制備、SDS-PAGE、轉膜、抗體結合、蛋白檢測等5個大步驟。二、試劑準備詳見文末附錄。三、實驗步驟1.樣本制備1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。2）貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ
RIPA裂解液，讀這些就夠了！2017/12/01
1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細胞膜（包括核膜），從組織或細胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規的WB、IP、co-IP等實驗。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細胞膜和蛋白
Benzonase Nuclease高活力核酸酶2017/05/23
BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸，拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測的結果很差，那么您的樣本可能遭受了核酸污染。如何去除核酸？超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法，但存在諸多缺陷（表1）。表1核酸去除，超聲法與DNase/RNase酶法優缺點超聲法DNase/RNase酶法優點利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內切酶活性，可在溫和條件下，較好的消化核酸缺點僅能
3D多肽水凝膠超越基質膠2017/03/03
PeptideHydrogelSuitablefor3DCellCulture——3D多肽水凝膠超越基質膠（matrigel）Yeasen多肽水凝膠產品是由一種由16個氨基酸組成的多肽，在鹽離子存在情況下自發組裝成的水凝膠支架結構。多肽的大小通常在5nm左右，是親水性和疏水性氨基酸殘基交替排列組成的兩性分子肽段，能形成折疊片結構，并自組裝形成納米纖維，這些納米纖維相互交織在一起形成基質并進一步形成含水量超過99.5%的水凝膠支架（見圖1）。Yeasen多肽水凝膠無需通過調節聚合物和交聯劑的量來獲
Chromotek GFP-Traps2016/03/23
關鍵詞：ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠德國ChromoTek公司成立于2008年，擁有德國制造的良好質量，致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發與研究，公司擁有強大的研發團隊，有*生物制劑，主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質量的實驗數據。產品包括單克隆抗體、重組單域抗體、熒光抗體、GFP或RFP連接蛋白等。德國ChromoTek是一家專業研發生產標簽抗體的公司，利用羊駝抗體的特異性解決了傳統GFP/RFP抗體分子量過大、轉染表達效率低的問題，研發
GFP-Trap用于免疫沉淀（IP）2016/03/10
關鍵詞：ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠*（ChromotekGFP-Traps已被600多篇同行評議的近期文獻引用）產品名稱產品貨號規格報價（元）*（元）GFP-Trap®_A,coupledtoagarosegta-2020rxns(500µl)63003300GFP-Trap用于免疫沉淀（IP）德國ChromoTek是一家專業研發生產標簽抗體的公司，利用羊駝抗體的特異性解決了傳統GFP/RFP抗體分子量過大、轉染表達效率低的問題，研發出分子量只有15k
單克隆抗體生產相關載體--pEE系列2015/08/03
單克隆抗體生產相關載體--pEE系列pEE系列載體是Lonza生物公司研發的GlutamineSynthetase(GS,谷氨酰胺合成酶)基因表達系統，利用谷氨酰胺合成酶篩選標記，能夠高水平的在哺乳細胞內表達目的基因，zui常用的有pEE6.4和pEE12.4表達載體。GS酶是生物體內以谷氨酸和氨為底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能夠被甲硫氨酸砜亞胺（methioninesulphoximine，MSX）選擇性的抑制。一些哺乳動物細胞，例如小鼠骨髓瘤細胞(NSO細胞系)無法表達GS，所以在不添
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