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上海遠慕生物科技有限公司
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實驗樣本的收集保存和運輸要求2021/11/30
1:病理標本收集及保存:1)冰凍切片:取下適當的組織塊放于液氮保存;2)石蠟切片:取下適當的組織塊放于4%多聚甲醛保存;3)細胞爬片:細胞爬片4%多聚甲醛固定30min,換PBS浸沒4℃保存。2:分子生物學標本收集及保存:1)新鮮組織:切割標本后放于液氮或者-80℃冰箱保存;2)石蠟標本:常溫保存;3)全血標本:取適量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管;4)體液標本:高速離心取沉淀;5)細胞標本:細胞加TRizol裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。3:蛋白質實驗標本收集及保存:1)新鮮組織:切割標本
蛋白marker--Western Blot(WB)實驗中的標尺2021/11/30
一、蛋白marker是什么?在WB實驗中,蛋白marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小,只有標準量精確無誤了,實驗結果才有說服力,除此之外,蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用,所以選擇正確的蛋白Marker也是westernblot實驗成功的必要條件之一。二、蛋白marker的分類總體來說,蛋白Marker可以分成未預染蛋白marker、預染marker二個級別。1.未染色(premixed)蛋白分子量標準未預染蛋白marker即寬分子量蛋白標準、高分
實驗動物分組和標記編號方法2021/11/29
一、分組1、分組原則實驗動物分組應嚴格按照隨機分組的原則進行,使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組中去,盡量避免人為因素對實驗造成的影響。2、建立對照組實驗動物分組時應特別注意建立對照組。對照組可分自身對照組和平行對照組。2.1自身對照組自身對照是把實驗動物本身在動物實驗前、后兩階段的各項相關數據,分別作為對照組和實驗組的結果并進行統計學處理。2.2平行對照組平行對照組分正對照組和負對照組(空白對照組)兩種。正對照組是對實驗動物實施與實驗動物相同但排除了所要觀察的目的因子(如治療手段或藥物)
反向PCR(inversePCR)了解一下2021/11/29
反向PCR是一種多聚合酶鏈式反應(PCR)應用的方法,可使已知序列的核心區邊側的未知RMA成幾何級數擴增。用適當的限制性內切裂解含核心區的RMA,以產生適合于PCR擴增大小的片段,然后片段的末端再連接形成環狀分子。PCR的引物同源于環上核心區的末端序列,但其方向可使鏈的延長經過環上的未知區而不是分開引物的核心區。這種反向PCR方法可用于擴增本來就在核心區旁邊的序列,還可應用于制備未知序列探針或測定邊側區域本身的上、下游序列。用傳統的緩沖液和其他提供者推薦的條件裂解RMA。反向PCR所擴增的片段的
免疫熒光技術中標本制作與注意事項2021/11/29
一、免疫熒光技術中標本制作的基本程序近似于酶免疫組化,不同點如下:1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理,封閉和一抗孵育與其相同。2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標記的二抗孵育,孵育時間根據抗體的工作濃度確定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。4、免疫熒光在封片時常使用封片劑或甘油:0.01MPBS(1:1)。條件許可,建議購買抗淬滅的封片液,使標本可以保存更久。5、熒光抗體的孵育以及后續處理需要避光。6、熒光抗體染色假陽性可能會多,需要分別設定陽性和陰性對照。二、注意事項1、熒光染色后一
酶聯免疫吸附(ELISA)實驗原理介紹2021/11/29
ELISA,即酶聯免疫吸附實驗,其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面,加入待檢標本,通過酶標物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術作為免疫標記技術(包含免疫熒光技術,免疫放射技術,免疫酶技術和免疫膠體金技術)中的一種,已廣泛應用于科研和臨床實驗中,具有快速、定性或者定量甚至定位的特點。ELISA可用于測定抗原,也可以測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶作用的底物。根
京尼平標準品,CAS:6902-77-8實驗分析2021/11/26
中文名稱:京尼平英文名稱:GenipinCAS:6902-77-8分子式:C11H14O5分子量:226.23EINECS號:636-196-5化學性質:白色結晶粉末,可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有機溶劑,來源于梔子果實。用途:京尼平對胃機能呈抗膽堿性的抑制作用,抗癌,保肝。用途:一種天然的交聯劑,從梔子果實中提取。可以防止脂質過氧化和一氧化氮的產生。有抗炎和抗血管生成的作用。參與藥物輸送系統。制備方法:京尼平的制備方法一般采用從梔子中提取京尼平苷,再用β-葡萄糖苷酶水解,然后用乙mi萃取、真空
流式檢測細胞樣本,樣本少時這么做2021/11/26
當樣本細胞數少的時候,你應該如何進行樣本處理?這個問題,曾經很多做實驗的都碰到過,尤其是做小動物的,例如做小鼠的胰腺組織,往往只能分離出不多的細胞,處理中又很容易丟掉,導致最后上機獲取到的細胞寥寥wu幾,給結果解讀帶來很大困難。因此,重要的是,如何盡量避免丟失,保障有足夠的細胞進行實驗呢。在Cyt-Geist中,匯總了以下建議,相信對遇到相同困境的FLOWER會有較大幫助:1、建議從野生型或其他相同細胞來源獲取細胞摻入進去。如果感興趣的細胞標記了熒光蛋白,那么可以使用沒有熒光蛋白標記的野生型細胞
ELISA實驗中時常出現復測原因分析2021/11/26
在ELISA實驗過程中時常會出現復測現象,即我們時常說的"花板"現象,這種現象影響檢驗結果的正確判讀,對工作造成一定的不利影響,一旦出現“花板”,實驗結果必須放棄,重新進行,不僅浪費物料和時間,而且還會出現樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。出現這現象的影響因素分析如下1、標本因素正確處理標本,防止大規模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭,防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測,但血清的分離應在抽血后等血液*凝固后再離心。2、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容
慢病毒在使用過程中可能遇到的問題2021/11/26
如何使用慢病毒感染細胞?使用慢病毒感染細胞的操作流程取決于細胞種類,因此首先要了解細胞的來源和背景。通常來講首先要根據MOI和需要感染細胞量計算所需要的病毒量,然后將所需病毒液加入培養體系后4小時左右即可換成*培養基正常培養。慢病毒染后為什么細胞中出現大量黑點,并影響細胞生長?在排除細菌及真菌污染后,細胞中的黑點通常為細胞碎片,導致細胞破碎的原因有很多,但在慢病毒感染后,細胞破碎通常有兩個原因:a.慢病毒使用量過多,或細胞數量過少;b.支原體污染。由于輕度的支原體污染并不影響細胞的生長和增殖,故
化學試劑變質了怎么辦?遠慕帶您預防!2021/11/25
實驗室化學試劑有沒有保質期,怎么辦?實驗室試劑為啥會變質,搞不懂?怎么樣才能延長它的保質期,我不會?是不是一頭霧水,腫么辦?不要慌!小編帶你了解其中奧妙,保證你一看就懂!要做到合理保管,一要了解試劑結構與性質間關系,二要創造適應試劑貯存的外部環境。一.化學試劑為啥會變質環境主要是指貯存的溫度、光照和介質。介質一般是指空氣和混有的雜質。貯存室里除空氣中含有的氧、二氧化碳和水蒸氣以外,還往往含有存放的各種揮發性試劑擴散到空氣中的蒸氣,常見的有氯化氫、硝酸、硫化氫、二氧化硫、溴、碘、乙烯、甲醛等蒸氣;
維生素B1的前處理,精華都在這里了!2021/11/25
在我們買的食品中都會看到一個營養標簽,有時會在標簽中看到維生素B1的含量,接下來就讓我們了解一下維生素檢測前處理的步驟吧。試劑配制20g/l的鐵qin化鉀溶液:稱取1g鐵qin化鉀,先用少量的水溶解后再定容至50ml。100g/l的氫氧化鈉溶液:稱取10g氫氧化鈉,加水溶解后定容至100ml。堿性鐵qin化鉀:將上述的5ml鐵qin化鉀和100ml的氫氧化鈉混合均勻后備用(現用現配)。0.1mol/l的鹽酸溶液:準確移取8.5ml濃鹽酸,加水稀釋至1000ml。2.0mol/l乙酸鈉溶液:稱取2
實驗室里需要注意的各種事項!2021/11/25
安全事項1.進實驗室之前應該穿實驗服,戴手套和口罩,必要時應該把普通口罩換成防毒面具。2.實驗室平常要保證通風良好。3.實驗室要備有洗眼器和風淋區。4.操作高溫儀器時需要佩戴防燙手套,自己辦公室最好常備一個小藥箱,放上燙燒膏,碘伏,棉簽紗布等,以備不時之需。5.禁止在實驗室驅逐打鬧,飲食飲水等。6.實驗室要配有溫濕度計。7.做實驗時女生不能散發,防止酒精燈點燃頭發。操作事項1.配戴手套直接使用電子天平,使用之前要調平衡,計數時要關天平門,使用后應該清掃天平及桌面,天平清零,關上天平門,以便下次使
微生物檢測實驗倒平板技巧!2021/11/25
實驗中相信大家都經常要倒平板吧?初學者往往都倒不好,導致后續實驗出現問題。這里總結幾點小技巧供大家參考:培養基傾注溫度1、培養基的傾注時適宜溫度約45℃。培養基置手心感覺不燙,但是置手背感覺燙時,培養基溫度大約就是45℃。培養基傾注時溫度太高的話,凝固時間較長,另外皿蓋上會有大量冷凝水,不利于后續實驗。溫度太低則容易出現倒板過程中瓶中培養基部分凝固的現象。2、有些培養基需要加入添加成分,這些添加成分在加入前應先放置到室溫,避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。3、目前多數實驗室培養基滅菌后會放置
溫度對微生物生長的影響2021/11/24
微生物與所處的環境之間具有復雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環境因素對微生物的生長和繁殖有影響,另一方面,微生物生長繁殖也會影響和改變環境.研究環境因素與微生物之間的關系,可以通過控制環境條件來利用微生物有益的一面,同時防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長的最重要因素之一。溫度對微生物的影響具體表現在:影響酶活性,溫度變化影響酶促反應速率,最終影響細胞合成。影響細胞膜的流動性,溫度高,流動性大,有利于物質的運輸,溫度低,流動性降低,不利于物質運輸,因此,溫度變化影響營養物質的吸收與代
免疫熒光染色小貼士,讓你的實驗少走彎路!2021/11/24
近年來隨著儀器和試劑的不斷發展,幾乎所有的免疫檢測應用都可以獲得熒光讀數。不過,盡管免疫熒光技術能夠提供靈敏而準確的結果,并適合多重檢測,但優化還是bi不可少的。操作方案要優化免疫熒光染色的操作方案通常包括:固定和透化、封閉、一抗孵育、洗滌、二抗孵育、再次洗滌以及測定讀數。大多數研究人員的染色方案都是一成不變的,因此建議在使用珍貴的樣本材料時,花點時間優化操作方案的每一步。就一抗孵育而言,必須考慮抗體的建議稀釋度,以實現高的信背比。若抗體濃度過低,則熒光信號較弱,可能難以與背景區分開,但抗體濃度
你的WB實驗內參是否選擇正確?2021/11/24
要想底氣十足地秀出你的WB實驗結果,單單內參對照就是一門學問。在對靶蛋白進行分析時,首先考慮是否等量上樣,其次考慮信號是否屬于檢測的線性范圍。那么,內參蛋白就尤為重要!通常,第一感覺內參蛋白就是β-actin或GAPDH等。實際上,可以選擇的內參有很多,而選擇內參有一定的標準。第一,實驗條件不能改變內參蛋白上樣量。第二,對照內參的分子量必須與靶蛋白不同。第三,也是最重要的一點,檢測到的內參蛋白和靶蛋白的信號必須在一個線性范圍內,否則你會發現你的條帶無法進行定量。然而,實際操作中,很多同學沒有意識
如何區分抗真菌、細菌化合物庫、抑制劑?2021/11/24
首先明確一下,抗生素不是消炎藥。抗生素是一種抗感染的藥物,而消炎藥具有消炎止痛的作用。在講消炎藥和抗生素之前,讓我們先明確兩個概念,炎癥和感染,并看一下二者之間的關系。抗生素的作用機制感染是由細菌、真菌、病毒、寄生蟲等病原體侵入人體所引起的局部組織和全身性炎癥反應。感染可以引起炎癥反應,如流感可以引起全身的發熱,頭痛,這就是因為流感病毒感染在體內引起的炎癥反應。確切的說,炎癥不是一種疾病,而是一種現象,通常表現為紅,腫,熱,痛等。除了感染可以引起炎癥之外,過敏、強酸腐蝕、外傷等也可以引起炎癥反應
凍干粉知識科譜(純干貨)!!2021/11/23
什么叫凍干粉?實際上凍干粉既并不是一類產品,也不是一種成份,只是一種存儲技術,便是用冷藏和干燥的方式,把東西從液態變為粉末狀。這類技術的益處是,一些成份在液體狀態不太平穩,因此制成粉末狀來儲存相關成分的活力,增加產品的保存期。凍干粉簡介:凍干粉是在無菌環境下將藥液冷凍成固態,抽真空將水分升華干燥而成的無菌粉劑。凍干粉是采用冷凍干燥機的真空冷凍干燥法預先將藥液里面的水分凍結,然后在真空無菌的環境下將藥液里面被凍結的水分升華,從而得到冷凍干燥而成。簡而言之,在低溫環境下抽中藥液里面的水份,保留其原有
濃縮蛋白質的儲存小技巧2021/11/23
蛋白質是非常敏感的,即使已經提取濃縮,在儲存時仍然會發生降解、聚合和失活。如下分析幾種保存方法的優缺點和一些小技巧,在儲存時應根據自己的蛋白和實驗需求選擇適合自己的方法,權衡利弊,以免造成實驗的麻煩。下面跟隨遠慕生物一起了解下吧!1.儲存在4°C溶液將濃縮蛋白質儲存在單一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中,放在4°C冰箱保存。優點:蛋白容易獲得,可以快速進行實驗,且同一管樣品可重復取樣,這樣避免了因經常解凍而加速蛋白的降解。缺點:在重復取樣時,溫度升高且暴露于環境中,可能會導致微生
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