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2022
03-23

細胞培養之~德國MB的支原體熒光定量PCR檢測試劑盒
在生物制品和細胞治療領域，支原體檢查是保證產品和治療安全的重要一環。傳統的培養法，已經無法滿足質檢中的快速又準確的要求。那么今天本站長要和大家分享德國MB的支原體熒光定量PCR檢測試劑盒。熒光定量PCR又稱qPCR。其原理是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環后產物總量的方法。德國MB的支原體qPCR檢測試劑盒，靈敏度達到了10CFU/ml。可以滿足所有國家藥典對于靈敏度的要求。而市場上其他的試劑盒一般只能達到100CFU，甚至于更低。大家注意哦，這里的數值指
2022
03-23

細胞培養之豬血清
預防豬瘟疫苗的生產、預防豬肺炎支原體疫苗以及預防非洲豬瘟等疫苗的生產，都是通過大規模的細胞培養而獲得。在檢驗這些疫苗的過程中，《獸藥典》規定使用豬血清。因此這些細胞培養過程，都要添加豬血清。豬血清作為細胞培養中重要的營養物質，因其天然性，而造成不同廠家由于取血、運輸、生產過程的質量控制不同，而造成血清質量的差異，進而對細胞培養的效率以及最終疫苗生產的產量造成巨大差異。作為重要的生產原料，豬血清的質量，對疫苗生產的質量和產量起到至關重要的作用。因此，在挑選豬血清時要注意以下幾點：1.要選擇能提供完
2022
03-21

細胞培養環境中，培養箱水槽和水浴鍋被支原體污染怎么辦？
小伙伴們都知道，在細胞培養環境中，培養箱水槽和水浴鍋中經常會有支原體以及各種細菌、真菌、霉菌滋生，水槽中的水源很容易就會成為細胞污染的重要來源。因此，有些實驗室每隔3-5天，就需要對細胞間的培養箱水槽或水浴鍋進行*刷洗，不但增加了工作量，而且有時還會影響試驗。在科技如此發達的今天，能不能有更簡便有效的方法呢？當然有！在眾多的細胞實驗室，很多都在用一款品名：WaterShield的水槽污染防護劑，它是德國MB公司十幾年前發明的，被世界科學家*，是細胞間bi備的水槽污染防護劑。1、WaterShie
2022
03-21

透析胎牛血清的妙用
血清是細胞培養過程中常用的生物試劑，市面上有很多種類的血清，今天就來給大家介紹其中的一款——透析胎牛血清。透析胎牛血清是采用透析的方法，過濾去除10KDa以下的小分子（如氨基酸、核苷：次黃piao呤和胸腺核苷等、膽固醇等），而保留血清中的大分子成分，因而可用于一些特定的細胞實驗，比如：需要避免細胞培養基中一些小分子干擾的實驗。那么，透析胎牛血清具體適用于實驗中有哪些常見場景？我們來詳細講講。一、實驗過程中需要標記氨基酸使用放射性標記小分子，對生物合成過程進行監測，以研究蛋白質等大分子的生化性質、
2022
03-18

疫苗生產的好幫手——新生牛血清
新生牛血清（NewCalfSerum，NBCS）,其血液采自出生0-30天內的新生牛。新生牛血清在科研用細胞培養、人用和獸用病毒疫苗生產領域已得到了廣泛的應用。病毒疫苗生產過程中，大規模的細胞培養需要挑選高品質新生牛血清。Ausbian新生牛血清與傳統新生牛相比，疫苗生產專用新生牛血清（病毒生產專用），能大大提高病毒最后的收獲效率，提高疫苗產量。在傳統新生牛血清中，含有大量多余的脂蛋白和纖連蛋白，當疫苗生產最后釋放病毒時，這些多余的脂蛋白和纖連蛋白會和病毒發生纏繞干擾，導致很多病毒無法被收獲。疫
2022
03-18

細胞培養之血清解凍的正確方法
今天來給大家介紹細胞培養實驗中，血清解凍的正確方法。首先，剛拿到的血清，為保證血清中各種細胞因子的活性，應趕緊放進-20℃冰箱中，避免反復凍融。當需要使用血清時，從-20℃冰箱中取出后，許多人會采用直接在4℃冰箱里過夜融化的方法，但在實際操作中，很多人會碰上血清出現沉淀或者由于血清中因子活性發生波動，而導致細胞培養發生波動等各種問題。關于沉淀析出的原理：我們都知道，在血清是含有多種大小分子蛋白以及水的混合物。當血清融化時，各種成分融化的速度會非常不同：蛋白質等干物質會先融化，水這類溶劑會相對滯后
2022
03-17

如何從血清檢測指標評價優質血清？
牛血清是目前細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的、細胞生長必需的營養成分，具有極為重要的功能。要保證血清質量，需要有嚴格的質控，包括從外觀到理化性質、細胞增殖試驗和微生物檢查，制定一系列的標準，以及出廠產品能符合這些標準。?外觀及相關物質含量以胎牛血清為例，優質的特級胎牛血清，外觀應是淡棕色至橙色透明液體，無顆粒物沉淀。PH在6.7-8.2之間；滲透壓在260-340mosm/kg之間；血紅蛋白含量小于20mg/dL；總蛋白含量在30-50g/L；白蛋白含量在14-34g/L；α、β、γ球
2022
03-17

細胞培養之支原體檢測方法~支原體檢測培養法
細胞培養過程中，由于實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發生支原體污染的頻率很高。據美國數據統計，細胞發生支原體污染的幾率在70%以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續受到影響，導致實驗數據不準確。之前我們說過兩種檢測方法：支原體常規PCR法和支原體檢測qPCR，今天介紹的是：支原體檢測方法之培養法
2022
03-16

細胞培養之支原體檢測方法~支原體常規PCR法
細胞培養過程中，由于實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發生支原體污染的頻率很高。據美國數據統計，細胞發生支原體污染的幾率在70%以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續受到影響，導致實驗數據不準確。支原體污染不僅是細胞培養中需要克服的現象，而且是制藥、生物制品生產中需要加以避免的。支原體污染的影響是
2022
03-16

細胞培養中用到的新生牛血清，究竟是什么，應該怎么挑選？
細胞培養中，常用的動物血清試劑一般有以下幾種：1、胎牛的血清2、透析處理后的胎牛血清，通常應用于特殊實驗，3、針對臨床細胞治療項目，做了特殊滅病毒處理的專用胎牛血清，4、本期主角新生牛血清5、馬的血清，大多用于神經細胞培養時添加使用，6、豬血清，大多于用于動物疫苗的大規模生產，是豬瘟疫苗的主要生產原料。今天我們主要來說說：新生牛血清。它采自出生1周到4周的新生牛的靜脈血（國際上各血清廠家的取血標準不同），經過靜置祛除血細胞，得到粗血清，然后在血清的生產車間經過多次過濾，去除雜質及大分子蛋白，而得
2022
03-15

細胞培養之支原體檢測方法~支原體檢測qPCR
在生物制品和細胞治療領域，支原體檢查是保證產品和治療安全的重要一環。生物源性原材料、采用細胞培養技術制備的疫苗、抗體，以及細胞或基因治療產品在生產過程的不同階段都要進行支原體污染的檢查接下來，本小助將為大家講解各種支原體檢測的方法比較。一，支原體熒光定量PCR,即qPCR.其原理是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。它的優點是準確度很高，特別是德國MB的試劑盒，靈敏度可以達到1
2022
03-15

細胞培養之“新生牛血清”
今天要和大家分享的是：細胞培養之“新生牛血清”。血清是細胞培養中的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，常用的幾種動物血清有以下幾種：1、胎牛血清2、透析胎牛血清3、細胞治療專用胎牛血清4、新生牛血清5、馬血清6、豬血清今天我們主要來說說：新生牛血清，它是采自出生后2周內的新生牛靜脈的血，新生牛血清中營養豐富，蛋白含量和各種生長因子較高，且價格較胎牛血清低得多，是動物細胞培養中常用的血清。也是由于新生牛血清因性價比高，所以被生物工程和疫苗生產領域廣泛使用。新生牛血清的品質決定著生產出來的
2022
03-14

支原體qPCR檢測試劑盒的操作步驟
支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養和器材要保證無菌；在細胞培養中加入適量的抗生素。如果受到支原體污染時，細胞形態較之無明顯變化，極易被忽視，往往直到污染非常嚴重時才能發現。受污染的細胞膜上可能有幾百個支原體，這些支原體競爭營養并釋放有毒的代謝產物，嚴重影響實驗
2022
03-14

您了解支原體qPCR法嗎？
在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染，估計細胞培養的同學就開始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后，如果不進行有效*的支原體清除，該實驗的細胞培養很難進行下去，細胞傳代3代以后狀態就急劇下滑，無法進行正常實驗，有的實驗室甚至只能指望換細胞間。那么怎樣才能有效檢測并清除支原體污染呢?支原體qPCR法介紹：熒光定量PCR法
2022
03-11

牛血清中球蛋白的作用
球蛋白(G或GLB)是多種蛋白質的混合物，包括具有防御作用而且含量較多的免疫球蛋白和補體、多種糖蛋白。球蛋白分類通過電泳的方法，球蛋白可分為α1，α2，β和γ球蛋白。它們大部分都是由肝臟合成。α1-球蛋白又分為α1-酸性糖蛋白和α脂蛋白。α1-酸性糖蛋白參與運輸氨基己糖，α脂蛋白參與運輸脂類。α2-球蛋白包括α2糖蛋白、纖溶酶原、凝血酶原、結合珠蛋白、銅藍蛋白和α2微球蛋白等。纖溶酶原、凝血酶原參與凝血。結合珠蛋白能和游離的血紅蛋白結合，防止血紅蛋白和鐵流失。銅藍蛋白參與銅代謝，95%的血漿銅離
2022
03-11

工作區域中祛除支原體的方法有哪些？
工作區域中祛除支原體的方法試驗臺、超凈臺、培養箱、液氮罐、移液器、門把手、電話等細胞培養環境被支原體污染，可引起細胞的污染。應定期對工作區域進行消毒。特點及原理1）快速有效噴霧劑中含有支原體專用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內迅速殺除支原體。2）廣譜抗菌不僅能*支原體，而且能有效祛除葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等。3）無腐蝕性和致癌性乙醇作為溶劑，無腐蝕性和致癌性成分4）操作簡便即用型消毒液，可以
2022
03-10

細胞培養中的污染監控與檢測——支原體
之前的文章中，我們說到如果在養細胞的過程中，如何判斷細胞是否被細菌、真菌感染，以及如何祛除細菌污染。還沒看的戳戳下面的鏈接直達今天我們來討論一下，細胞培養過程中的，更難處理的支原體污染。三、支原體污染支原體概述：支原體（mycoplasma）是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養基培養增殖的最小原核細胞型微生物，大小為0.1～0.3微米。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱為支原體。在細胞培養過程中，顯微鏡很難捕捉到它們的身影，與細胞競爭營養，影響細胞生長，最終導致實驗出現偏差。支原
2022
03-10

支原體污染會對細胞培養有何影響？
細胞培養過程中，由于實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發生支原體污染的頻率很高。據美國數據統計，細胞發生支原體污染的幾率在70%以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續受到影響，導致實驗數據不準確。支原體污染不僅是細胞培養中需要克服的現象，而且是制藥、生物制品生產中需要加以避免的。支原體污染的影響是
2022
03-09

細胞培養之——豬血清
疫苗在預防豬常見傳染病方面起著非常重要的作用。它包括豬瘟疫苗、豬肺炎支原體疫苗以及正處在研發熱點中的非洲豬瘟等疫苗。在豬病毒疫苗和肺炎支原體疫苗生產中，血清是常見的生產細胞用的培養液成分。尤其是豬血清，常用于豬肺炎支原體疫苗的生產。在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中，《獸藥典》也明確推薦了豬血清作為支原體檢驗用液體培養基的組成成分。并且，《獸藥典》指出在【豬支原體肺炎微量間接血凝試驗】和【豬支氣管敗血波氏桿菌凝集試驗】中需要陰性血清，即正常豬血清。在豬瘟疫苗等其他豬病毒疫苗的生產中，常用豬腎細胞（
2022
03-09

細胞培養之——馬血清
背景介紹馬血清一般分為兩種：第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多，適合用于蛋白封閉；第二種馬血清為細胞培養級。它經過多次過濾，祛除了許多大分子蛋白，但保留了血清中促細胞生長的活性因子，因而能用于細胞培養，例如神經細胞培養時，培養基中即需要添加馬血清。細胞培養級馬血清的應用，具體列舉如下：1.馬血清可用于細胞培養和干細胞的誘導分化，例如：（1）RPMI-1640培養液加馬血清培養臍帶血單個核細胞（參考文獻：李春莉,王建偉,姜蓉,etal.人參總皂苷誘導紅系血細胞增殖的信號轉號[J].中國組織工程研究

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