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2023
10-09

如何選擇合適的DNA提取試劑盒？
實驗室工作中，經常會需要用到純化的DNA，這時我們通常需要使用一個商業的DNA提取試劑盒對目的DNA進行分離純化。那么我們該如何選擇合適的DNA提取試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實驗室培養的細胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某些應用的試劑盒。例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血紅蛋白會污
2023
10-09

DNA提取試劑盒的原理是什么？
如今，大多數實驗室都使用商業DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA）。那么DNA提取試劑盒的原理是什么呢？讓我們一起來看看吧！一、RNA和DNA提取裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白
2023
10-09

ELISA試劑盒的原理是什么？
你知道ELISA試劑盒的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。Elisa試劑盒在國內有許多種叫法，例如:Elisa檢測試劑盒、ElisaKit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異
2023
10-09

ELISA檢測方法有哪些？
根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件的不同，所使用的檢測方法也不同，那么ELISA檢測方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是將特異性抗體結合到固相載體上形成固相抗體，然后和待測血清中的響應抗原結合形成免疫復合物，洗滌后加酶標記抗體，與免疫復合物中的抗原結合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物，加底物顯色，判斷抗原的含量。二、競爭法首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標記抗原，經孵育洗滌后加底物顯
2023
10-09

什么是文庫構建？
基于NGS測序的諸多優點，故此技術在全球測序市場上占有著絕對的優勢位置，而新一代測序（NGS）文庫制備是一體化測序流程中的一個關鍵因素，那么什么是文庫構建呢？讓我們一起來看看吧！基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因組文庫，后者包括cDNA文庫。文庫構建的基礎是將目標RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來，并通過機械破碎或者是酶切法對其進行片段化。如果前面提取的是RNA樣本，則需
2023
10-08

不同動物細胞或組織的蛋白質抽提步驟是怎樣的？
你知道不同動物細胞或組織的蛋白質抽提步驟是怎樣的嗎？讓我們一起來看看吧！一、培養的貼壁動物細胞的蛋白質抽提步驟1.從貼壁細胞培養瓶中小心傾去培養液。2.預冷的PBS清洗貼壁的細胞2次，小心傾去PBS。3.配置含抑制劑的蛋白質抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液，5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液）。4.細胞瓶中加入預冷的含抑制劑的蛋白質抽提試劑（107個細胞中加入1ml抽提試劑；5×106個細胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動5分鐘。5.用一預冷的橡膠和塑料細胞刮將培養瓶壁
2023
10-08

質粒構建實驗影響因素有哪些？
質粒構建是指選定的目的外源基因（DNA）先要經過PCR擴增。隨后用限制性內切酶分別切割載體和外源DNA片段，再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接，轉入宿主細胞。最后經過篩選鑒定出正確的重組克隆質粒，實現目的基因在宿主細胞內的正確表達。那么質粒構建實驗影響因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、載體的選擇在選擇克隆載體時應注意以下幾點：①具有自主復制能力，拷貝數高；②攜帶易于篩選的選擇標記；③含有多種限制酶的單一識別序列，以供外源基因插入；④載體應盡可能小（＜15kb），便于導入細胞和進
2023
10-08

影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些？
熒光原位雜交是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。那么影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、固定液的選擇及固定時間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12～48h，其它固定液對實驗結果可能產生一定的影響。②組織標本離體后應盡快固定，較大標本切開固定。如樣本固定不及時，熒光信號會減弱。（尤其環境溫度較高時更應及時固定）③固定液體積應不少于標本體積的10倍，否則固定不充分，容易出現無信號
2023
10-08

流式細胞周期檢測的常見問題有哪些？
你知道流式細胞周期檢測的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣本制備注意事項1.根據不同的檢測細胞調整合適的溫度、濕度、酸堿度等培養環境，注意一定要無菌的環境培養。2.培養細胞時，以對數期處理為宜，避免細胞量過少導致收集細胞量不足或者細胞量過多導致細胞開始大量死亡造成的實驗誤差。3.流式檢測細胞周期上機檢測所需收集細胞量較多，收集細胞時盡量多收集一些4.流式檢測對細胞離心，重懸次數較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷、弄破細胞。5.本實驗對細胞離心，重懸次數較多，注意動作輕緩，避免過多地損傷
2023
10-08

【干貨】一文了解vero細胞培養全流程
Vero細胞系是連續非整倍體細胞，連續細胞系可以經過多次分裂而不衰老，非整倍體是指細胞中的染色體數目與通常的不同。與其它普通哺乳動物細胞不同，Vero細胞還有干擾素分泌缺陷的特點，當被病毒感染時，它不能分泌干擾素，但它仍然具有α/β-干擾素的受體，所以對于其它來源的干擾素仍有正常的反應。一、基本信息細胞名稱：Vero非洲綠猴腎細胞細胞別稱：VERO;Verdareno細胞形態：上皮細胞樣生長特性：貼壁生長組織來源：正常腎培養基：MEM+10%FBS+1%PS生長條件：①氣相：95%空氣+5%二氧
2023
10-07

原代細胞培養的分離注意事項有什么？
分離是原代細胞培養的重要步驟之一，那么你知道原代細胞培養的分離注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、組織塊培養法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2.加入的培養液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3.當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。4.為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養
2023
10-07

原代細胞取材的注意事項有哪些？
取材作為原代細胞培養過程中至關重要的一步，那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、皮膚和粘膜主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。二、內臟和實體瘤1.無菌環境；2.熟悉所需組織的類型和部位；3.要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。三、血液細胞一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞，取材時應注意抗凝。四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可
2023
10-07

WB實驗常見問題有哪些？如何解決？
WesternBlot雖是實驗室zui常用的蛋白分析技術，但是由于它步驟繁瑣、操作流程長、影響因素多，所以導致在實驗過程中會遇到各式各樣的問題，那么你知道WB實驗常見問題有哪些呢？該如何解決呢？讓我們一起來看看吧！一、目標條帶沒有信號原因分析：1.樣品中可能含有蛋白酶，使蛋白樣品分解成小分子。2.目標蛋白濃度過低（低于檢測下線）。3.轉膜時間太短導致目標蛋白沒有充分轉移到膜上，或者轉膜時間過長導致樣品轉穿。4.一抗的特異性不佳，導致一抗無法識別目標蛋白。解決方法：1.添加蛋白酶抑制劑。2.加大上
2023
10-07

你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？
RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段，那么你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！以Trizol法提取組織細胞為例：1.提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5~106個細胞加1mlTrizol后，反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞；2.將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml
2023
10-07

RNA提取成功的要點有哪些？
RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復凍融。2.提取時組織要充分研磨，組織量不宜過少，更不宜過多。3.加入裂解液后應給予充分的孵育時間，使樣本充分裂解。4.在用Trizol法提取時，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬不能提取到中間層，否則會導致嚴重的基因組DNA污染。5.洗滌時
2023
09-28

Alzet滲透泵2002使用注意事項
Alzet滲透泵2002是一種小型、可植入式的膠囊滲透泵，可應用于小鼠、大鼠及其他實驗動物研究。該泵無需進行外部連接或頻繁處理，就能以恒定的速率持續給藥1天到14天的時間。Alzet滲透泵2002泵送率為0.5μl/hr(±0.1μl/hr)，持續時間為14天，泵容量為200μl。Alzet滲透泵2002由3個組件組成，分別是：灌注管(fillingtube)、流量調節器(flowmoderator)、泵(pumpbodymaterials)。為了更好的使用Alzet滲透泵2002，在使用時，有
2023
09-28

Alzet滲透泵工作原理
Alzet滲透泵(ALZETOsmoticPump)，又名為Alzet植入式膠囊滲透壓泵，是一種高效動物給藥系統。Alzet滲透泵體積小巧，常用于大鼠、小鼠及其他實驗動物的藥劑泵送。Alzet滲透泵共有12個型號的產品，可根據給藥時間、給藥速度來選擇合適的型號，具體的產品型、泵容積、泵送速率見下表：Alzet滲透泵可植入動物的皮下或者腹腔內，亦可連接上導管，輸送到動脈或者靜脈內，從而到達局部組織或者器官，從歷年的文獻來看，科學家們已經將Alzet滲透泵應用到了如腦、脊髓、肝臟、脾臟等器官或組織，
2023
09-28

流式細胞術的應用有什么？
流式細胞術（FCM）是一種對處在快速流動中的細胞或其它生物微粒逐個進行多參數的快速定量分析和分選的技術。它集計算機技術、激光技術、流體力學、熒光標記技術、單克隆抗體技術、細胞免疫學于一體，按照細胞或生物顆粒的物理或化學性質，同時具有分析和分選細胞或生物顆粒的功能。那么你知道流式細胞術的應用有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、流式細胞術科研應用1.細胞凋亡檢測在正常細胞中，細胞膜上的磷脂酰絲氨酸（PS）位于胞漿側。細胞凋亡中期，PS外翻。AnnexinV是一種Ca2+依賴的對PS具有高度親和力的磷脂
2023
09-28

Alzet Osmotic Pumps說明書
AlzetOsmoticPumps有多種尺寸、持續時間和流量可供選擇，以滿足廣泛的研究需求。當每種型號的滲透泵送速率在制造時是固定的時，可通過改變每臺滲透泵中填充的藥劑濃度來調整輸送藥劑的劑量。如果動物足夠大，可同時植入多個滲透泵，以獲得比單滲透泵更高的輸送速率。對于更長時間的輸送，滲透泵可以連續植入，而不會產生不良影響。更多請參照AlzetOsmoticPumps的使用說明書。一、動物注意事項AlzetOsmoticPumps可根據以下動物尺寸指南植入皮下或腹腔。AlzetOsmoticPum
2023
09-28

流式細胞儀的常見問題有哪些？
流式細胞儀(flowcytometry，FCM)作為一種強大的單細胞分析工具，可以對于處在快速直線流動狀態中的細胞或生物顆粒同時進行多參數、快速定量分析和分選的高新技術。那么流式細胞儀的常見問題有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、抗體孵育時間過長會影響檢測結果嗎？通常情況下，標記細胞表面抗原的熒光抗體需要在室溫孵育20-30分鐘。對于一些狀態較脆弱的細胞（例如從組織中分離、培養的免疫細胞），切勿過長時間孵育，同時建議使用染色緩沖液（StainingBuffer），其中主要成分為PBS，疊氮鈉和胎牛

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