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逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）實驗步驟及注意事項2024/05/20

逆轉錄-聚合酶鏈反應（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR）的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。實驗步驟：一、總RNA的提取按照總RNA提取實驗步驟提取組織或細胞中的總RNA。二、cDNA第一鏈的合成目前試劑公司有多種cDNA第一鏈試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。現以

培養細胞的實驗中污染途徑追蹤2024/05/13

在培養細胞的實驗中，難免培養的細胞被污染了，得不到想要的實驗結果，那么你知道細胞培養的污染來源有哪些嗎？細胞培養過程中污染的來源主要有以下幾條途徑：1、不潔的動物組織標本很多動物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統除外)，但由于取材時不小心也會有污染的機會。組織本身含有細菌，如取材時不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡，也會帶菌，造成細胞污染。2、空氣空氣中含有大量的微生物，如果操作室與外界隔離不嚴或消毒不充分下，很容易造成污染。另外，凈化工作臺使用過久，濾板未定期更換或長久不更換，

細胞污染預防措施參考2024/05/06

細胞的體外培養需要理想的氣體環境，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件。二氧化碳不僅是細胞生長的必需成分，還與維持培養液的pH有關。氧氣參與細胞的三羧酸循環，為細胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產物，是細胞生長的必需成分，又與維持培養液的pH有關。大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。細胞污染的預防：①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要*，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩

微生物分離純化多種方法分述2024/04/28

含有一種以上的微生物培養物稱為混和培養物（mixedculture）。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養（pureculture）。在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過程稱為分離純化，方法有許多種。１、傾注平板法首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50℃左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，取單個

ELISA免疫分析操作要點2024/04/22

ELISA免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。操作步驟:免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標記的抗體通過直

實驗室菌種應用全面解析2024/04/16

幾種菌株概述：標準菌株：直接從菌種保藏機構獲得并至少定義到屬或種的水平的菌株。通常默認為第0代菌株。標準儲備菌株：將標準菌株在實驗室轉接一代后得到的一套相同的獨立菌株。通常為第1代或第2代菌株。儲備菌株：從標準儲備菌株轉接一代獲得的培養物。通常為第2代或第3代菌株。工作菌株：由標準儲備菌株、儲備菌株或標準物質（經證明或未經證明）轉接一代獲得的菌株。通常為第3-5代菌。傳代：每一次的轉接培養都是一次傳代的過程，可以使用液體、固體或半固體培養基。注意事項：菌株傳代只能由上往下傳，儲備菌株可以做為工作

鑒別生化試劑盒是否適合實驗要求方法大全2024/04/08

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

微生物培養基滅菌方法合集2024/04/01

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有水、氮源、無機鹽（包括微量元素）、碳源、生長因子（維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基（如組織培養基），較長時間的貯存，必須放在3-6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管，均改制成粉末。培養基由于富含營養物質，

RT-PCR 實驗重點要素有什么?2024/03/25

RT-PCR就是逆轉錄PCR（reversetranscriptionPCR）或者稱反轉錄PCR（reversetranscription-PCR,RT-PCR），是聚合酶鏈式反應（PCR）的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。逆轉錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉錄引物主要有

實驗室檢測質量控制需考慮方面闡述2024/03/18

實驗室為了確保檢測數據的準確可靠，以保證檢測報告的質量，在檢驗檢測工作中必須有一個質量控制的過程，必須明確質量控制各階段可能影響檢測報告的各項因素。從而對這些因素采取相應的措施加以管理和控制，以使其過程處于受控狀態。實驗室主要從實驗室環境、設備、樣品、過程四個方面進行質量控制：一、環境質量的控制1.檢測場所的環境條件應滿足檢測工作的需要，應采取措施確保實驗室的內務良好，必要時制定專門的工作程序。對影響分析檢測質量的區域加以控制，限制進入或使用該區域，并根據其特定的情況確定控制的程度。將不相容活動

細胞活躍措施方法2024/03/11

細胞，生物學名詞，生物體的結構和功能的基本單位。一般具有細胞核、細胞質和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣，主要由細胞核與細胞質構成，表面有薄膜。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁，細胞壁中常有質體，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養和繁殖等機能。細胞是許多生物學實驗的主角。如果細胞心情不好，那么實驗的結果也不會好到哪兒去。如何讓細胞快樂？下面就仔細了解一下吧!1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養的大

ELISA實驗定性測定結果判斷方法解讀2024/03/04

ELISA實驗定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔

ELISA酶聯免疫吸附試驗主要檢測方法敘述2024/02/26

ELISA（酶聯免疫吸附試驗）是一種免疫測定方法，通常用于量化樣品中特定目標的水平。常規用于ELISAs的樣本包括血清、血漿、細胞培養上清液、細胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液。酶聯免疫吸附試驗通常在96孔微孔板中進行，微孔板上涂有對相關分析物的特異性捕獲抗體。在與實驗樣品、標準品或對照品孵化時，目標分析物被該抗體捕獲，一個共軛的檢測抗體與目標分析物上的不同表位結合。隨后加入底物溶液，產生一個與分析物結合量成比例的信號。ELISA的三個主要方法是夾心法、間接法、和競爭法，每種類型的ELISA都有

ELISA檢測實驗常見問題解答2024/02/19

ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。1.產品有哪幾種規格？可檢測多少個樣本？產品規格為96T。每次實驗的標準曲線一般設7個不同濃度，加上空白孔，標準曲線一共需要8個孔。因此，一個96T試劑盒最多可以測定88個樣本（不做重復且一次用完）。板條可拆卸，可滿足您少量多次實驗需求。2.產品的穩定性如何？產品在研發前期已通過嚴格的穩定測試，發貨前亦須通過檢測并提供質檢報告，在市場上深受廣大客戶的贊許！3.一次ELISA實驗需要多長時間？雙抗體夾心ELISA法一次實驗

培養基滅菌的原理和方法2024/02/05

所謂滅菌就是殺死一切微生物，包括微生物的營養體和芽孢，這一概念不同于消毒。滅菌的方法很多，在實驗室可以使用干熱滅菌、對于環境可以使用化學試劑滅菌，但化學試劑的滅菌方法有很大的限制。在工業生產中，對于培養基、管道、設備的滅菌，通常采用蒸汽加熱到一定的溫度，并保溫一段時間的滅菌方法，稱之為濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優點是：使用方便，無污染，而且其冷凝水可以直接冷凝在培養基中，也可以通過管道排出。下面介紹滅菌方法：一、化學物質滅菌原理：藥物與微生物細胞中的成分反應，使蛋白質變性酶失活。使用范圍：器皿、雙

PCR反應擴增產物出問題分析2024/01/29

聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR實驗過程中擴增產物常出現各種問題，以下列舉解決方案供參考：一、擴增產物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散（1）酶量過高。減少酶量；酶的質量差，調換另一來源的酶。（2）dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。（3）MgCl2濃度過高。可適當降低其用量。（4）模板量過多。質粒DNA的用量應（5）引物濃度不夠優化。對引物進行梯度稀釋重復PCR反應。（6）循環次數過多；增加模板量減少循環次數至30，縮短退火時間及延伸時間，或改用二種溫

血清的作用及血清的篩選方法步驟2024/01/22

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清在細胞培養中的作用主要有以下幾點：1.提供對維持細胞指數生長的激素，特別是基礎培養基中沒有或量很少的營養物，還包括一些主要的低分子營養物；2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力；3.血清中含有一些微量元素，有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用；4.細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源；5.血清蛋白形成了血清

PCR反應條件的選擇技巧總結2024/01/15

PCR反應條件的選擇技巧主要體現在溫度、時間和循環次數上，溫度過高，延伸時間不夠都會對實驗結果有很大的影響，以下看實戰總結方法技巧。一、溫度和時間溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合

原代培養技術的重點關注事項2024/01/08

原代培養：字面意思即第1次培養，但實際上，通常把第1代至第10代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。原代培養技術的重點關注事項：一、注意污染1、嚴格進行動物皮膚消毒，使用三套器械取材。新生動物皮膚先用2%碘酒液消毒，成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。2、嚴格進行無菌操作，防止細菌、霉菌、支原體污染，避免化學物質污染。自取材開始，保持所有組織細胞處于無菌條件。細胞計數可在有菌環境中進行。3、吸取液體前，瓶口和吸管進行火焰消毒；吸取液體時，避免瓶口和吸管碰撞。4、離心管入臺前，管口、管

PCR反應的基本條件溫度循環參數淺析2024/01/02

PCR反應的基本條件溫度循環參數：1．變性溫度與時間PCR反應中模板DNA的變性十分重要。只有全性的模板DNA和PCR產物雙鏈全解開，才能有效的和引物結合。這種結合是PCR擴增的基礎。變性溫度越高，時間越長變性就越充分。但溫度過高、時間過長又會影響TaqDNA聚合酶的活性，所以通常選用變性溫度為95℃30s為宜。在PCR反應中第一個循環變性最重要，需時間較長，因模板DNA的鏈比較長。2．復性溫度與時間變性溫度是PCR反應成敗的關鍵，復性溫度決定著PCR的特異性。溫度越低復性越好，但是容易出現引物