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細胞凍存，讓細胞重活過來！2022/01/15

雖然目前組織和器官的冷凍保存極其困難，但是隨著生命科學(xué)的進步，細胞凍存技術(shù)已經(jīng)成為了細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用，在科研實驗中也是重要的一環(huán)。被凍存在液氮中的年輕細胞，不僅可以治療疾病，還能延長壽命、延緩衰老等等，對于個人和未來醫(yī)學(xué)的發(fā)展都非常有意義。如為新生兒凍存臍

細胞培養(yǎng)遇到問題？怎么解決？2022/01/15

培養(yǎng)細胞的過程中，時常會遇到各種的問題，怎么辦？以下是整理的一些常用問題的解決辦法。培養(yǎng)液pH值變化太快可能原因：(1)CO2張力不對。(2)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。(3)NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。(4)培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。(5)細菌、酵母或真菌污染。建議解決方法：(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。(2)松開瓶蓋1/4圈。(3)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。(

為什么要使用原代細胞？2022/01/15

細胞體外培養(yǎng)很好地補充了體內(nèi)實驗的不足，它讓細胞功能和進程的研究更具可操作性。十幾年來，細胞系已在科學(xué)發(fā)展中起了重要作用，然而僅僅由細胞系得來的數(shù)據(jù)越來越難有說服力。細胞系誤認和細胞不純等因素鞭策研究者們越來越傾向于使用原代細胞。細胞系還有一個缺點是，它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細胞保持了細胞在體內(nèi)的許多重要標志和功能。例如內(nèi)皮細胞系缺少許多功能標志，而原代內(nèi)皮細胞就保留了這些重要特征。基因表達直接影響細胞功能，基因表達分析對研究原代細胞起重要作用。傳統(tǒng)的報告基因檢測

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細胞培養(yǎng)方法技巧2022/01/15

SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞簡單介紹：骨髓原始間充質(zhì)干細胞(SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞)是骨髓基質(zhì)干細胞，是人們在哺乳動物的骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成肌細胞的多種分化潛能的細胞亞群。它們對骨髓中的造血干細胞（HSC）不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。常用的分離MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法，(SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞)全骨髓法即根據(jù)干細胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢特性，定期換液除去不貼壁

實驗室試劑如何科學(xué)管理？2022/01/10

一、實驗室試劑管理普遍存在的問題1．無試劑專庫。試劑儲藏室與實驗準備在同一房間內(nèi)，致使室內(nèi)空氣的相對濕度過大，試劑易變質(zhì)失效。2.保管環(huán)境不良。缺乏良好的通風(fēng)設(shè)備，既影響試劑的質(zhì)量，也影響工作人員的身體健康。3.無清庫制度。某些試劑庫存時間過長、庫存過多，造成浪費。4.缺乏規(guī)范分類知識與措施。試劑分類不科學(xué)，使用不方便。5.環(huán)保意識差。過期試劑不經(jīng)過無害處理就隨意丟棄。二、實驗室試劑管理原則1.專人、專庫、專柜管理原則設(shè)定具有相應(yīng)專業(yè)水平、管理水平和高度責任心的專職管理人員，從事試劑的保管工作，

流式細胞術(shù)的空白對照、同型對照、FMO對照要怎么選？2022/01/10

流式數(shù)據(jù)分析時，應(yīng)該把門設(shè)在哪里合適呢，特別是那些分群不明顯的結(jié)果。我們知道流式細胞術(shù)常見的有空白對照（未染色細胞）、同型對照和FMO對照，每種對照適用于什么情況呢？1、空白對照：空白對照的作用是作為電壓調(diào)節(jié)的參考，調(diào)整電壓參數(shù)使細胞信號在圖上各個通道的合適位置。同時，也是可以看到細胞的本底信號，圈門時直接排除。未處理的細胞，不能作為處理組細胞的圈門依據(jù)，需要使用相同處理組的空白對照，來觀察細胞的本底信號。空白對照適用于細胞分群明顯、背景熒光弱、已有大量研究的分群明確的細胞群圈門，例如CD3、C

培養(yǎng)基的顏色改變代表著什么？2022/01/10

我們剛剛購買回來的培養(yǎng)基是鮮紅色的，為什么不是綠色、藍色的呢？培養(yǎng)基的顏色主要來自酚紅，酚紅指示顏色非常靈敏，pH值范圍為6-8，顏色由黃變?yōu)樽霞t。為了培養(yǎng)方便，能讓我們直觀地感覺培養(yǎng)液的狀況，加入酚紅后，如果培養(yǎng)液偏酸，就顯示偏黃色，偏堿性則會顯示偏紫色。一般來說，污染細菌或者長時間不換液時，培養(yǎng)基變成黃色，主要是因為細菌和細胞過度增長，產(chǎn)生了酸性物質(zhì)。開封后的培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳會逐漸溢出，pH偏堿性，所以培養(yǎng)基就偏紫色了。偏紫色的培養(yǎng)基，可以通入無菌過濾的二氧化碳，調(diào)

siRNA和shRNA有什么區(qū)別？2022/01/10

shRNA即短發(fā)卡RNA（shorthairpinRNA），包含一段緊密發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)，常被用于RNA干擾沉默靶基因的表達。siRNA是小干擾RNA，是一種雙鏈RNA，3’端含有兩個突出的非配對堿基。siRNA可以激活RNA干擾，信使鏈被移除，向?qū)ф溡龑?dǎo)對靶標RNA的切割和降解。雖然siRNA和shRNA都可用于蛋白沉默，但它們的作用機制有所不同。shRNA是siRNA或者miRNA的前體，shRNA在轉(zhuǎn)錄后可以從細胞核轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)，在細胞質(zhì)中其環(huán)結(jié)構(gòu)被Dicer酶切割，釋放siRNA。siRNA的

細胞誘導(dǎo)與檢測方法2022/01/10

使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上，密度為2×105-3×105cells/cm2或2×105-3×105cells/孔，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞匯合度達到80%-90%時，小心的將孔內(nèi)間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養(yǎng)基,以此記為第0天。一、細胞誘導(dǎo)前可使用多聚賴氨酸溶液進行細胞包被，以便細胞更好的進行貼壁。二、每隔1-2天更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養(yǎng)基；注意：為防止脂肪細胞脫落，建議誘

ELISA實驗操作注意事項及常見問題解答2022/01/06

一、ELISA操作前準備工作試劑盒的選擇ELISA操作前，應(yīng)做好實驗的設(shè)計、選擇適合自己檢測范圍和靈敏度的試劑盒、提前訂購和準備試劑及耗材、處理樣本等準備工作。樣本處理在收集標本前需有一個完整的計劃，需要清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA檢測提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，請取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。二、ELISA

原代細胞培養(yǎng)實驗注意事項詳解2022/01/06

（1）原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選取繁殖能力較強的組織，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。（2）要注意無菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù)（3）整個取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡乙醇時間1min左右，不能過長，以確保胚胎細胞活性。（4）運用消化法時胰酶溫度應(yīng)低于37℃，濃度只需平時消化細胞濃度的一半。因為此過程不像消化培養(yǎng)細胞時的1~10min，而是至少20min，先消化下來的細胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上。所以胰酶不能作用過強，否則這些細胞易被損傷而不易生存。（5）如使用組織塊法，則

BV2細胞異常生長形態(tài)解析及解決方案2022/01/06

BV2常用的小膠質(zhì)細胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒（J2）感染原代小膠質(zhì)細胞而獲得永生化。BV2細胞表達非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過氧化物酶活性。這種細胞不僅會分泌溶菌酶，在適當?shù)拇碳は拢€會分泌白細胞介素1和腫瘤壞死因子。此外，BV2細胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。從表型上看，BV2細胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性，而對MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。圖A.BV2細胞顯微照片

細胞不貼壁、生長緩慢是什么情況？2022/01/06

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度；●支原體污染；●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；●細胞老化；●接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；●啟用新的保種細胞；●調(diào)節(jié)

如何提高蛋白質(zhì)免疫印跡實驗（Western Blot）的成功率？2022/01/05

近些年來，蛋白質(zhì)組學(xué)研究是生物領(lǐng)域比較熱門和研究廣泛的方向。而WesternBlot實驗是研究蛋白組學(xué)的基本實驗操作。但是一個成功的WesternBlot實驗結(jié)果需要注意很多細節(jié)。WesternBlot即蛋白質(zhì)免疫印跡實驗，利用抗原抗體特異性結(jié)合來檢測目的蛋白的表達量。蛋白質(zhì)印跡法是由瑞士*弗雷德里希生物研究所（FriedrichMiescherInstitute）的HarryTowbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（NealBurnette）于1981年所著的《分析生物化學(xué)》（Analy

細胞培養(yǎng)時如何對器皿進行表面處理？2022/01/05

在實驗室中，我們一般會用聚丙乙烯制成的無菌培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿或多孔板來培養(yǎng)細胞。它們透光性好、生長面平滑、能夠提供質(zhì)地均勻、重復(fù)性好的單層培養(yǎng)物。然而由于是人工合成的，因此聚丙乙烯是疏水性的，表面不適宜細胞生長，故用于組織培養(yǎng)的塑料，都要經(jīng)過γ射線照射、化學(xué)處理或電離輻射，以產(chǎn)生親水的帶電表面，使細胞能夠附著。附著遇到的最大困難是如何讓細胞附著上去，而包被附著物有可能會促進細胞的粘附。在很多時候，為了適應(yīng)不同實驗的需求、解決細胞貼壁不牢的問題，我們需要對培養(yǎng)器皿用不同的物質(zhì)進行包被后使用。這些物質(zhì)可

防污指南——推薦這幾個實驗室常用滅菌方式！2022/01/05

那細胞往哪放呢？培養(yǎng)材料消毒了嗎？真是不讓人省心.....哎呀，哪那么容易污染？世上可沒有后悔藥哦做實驗第一步要做什么？檢查實驗環(huán)境實驗醫(yī)學(xué)微生物學(xué)常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠制品及塑料制品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。嚴格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整個實驗?zāi)芊耥樌M行。很多小伙伴在進行實驗時經(jīng)常會出現(xiàn)各種形形色色的問題，甚至是大型翻車現(xiàn)場，這其中最根本的原因就在于實驗操作不規(guī)范、消毒、滅菌方式不規(guī)范，今天就跟小編一起了解一下實驗室常用的滅菌消毒方式。實驗室常用滅菌

血清常見問題解決方法2022/01/05

正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？血清為動物來源，成分復(fù)雜，不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。?血清應(yīng)如何保存？未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標識的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。?血清的有效期是多久？大部分血清效期是5年，針對每個批次，請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。?血清應(yīng)如何融解？從冰箱中取出血清，放于2-8

細胞不好養(yǎng)？是因為它不夠好。2022/01/05

培養(yǎng)基“細胞的家”培養(yǎng)細胞的重要環(huán)節(jié)很多，其中重要的一步就是為細胞選擇適合的生長環(huán)境，建立一個細胞滿意的“家”—成分適合又營養(yǎng)豐富細胞培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)基是供給細胞營養(yǎng)、維持細胞生長和增殖的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類一般包括經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。這其中又以經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基最為常用。經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計、配制的培養(yǎng)基，但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分仍然無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)

常見細胞污染類型及預(yù)防辦法2022/01/04

凡混入細胞培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存有害的成分和造成細胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細胞污染不能*被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴重性。本文將簡要介紹幾種常見的細胞污染類型及處理方法。常見污染類型細菌污染特征：大小在0.5~5μm，比動物細胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時爆發(fā)式增殖；營養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運動。處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。真菌污染特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可

HK-2細胞出現(xiàn)空泡是正常的嗎？2022/01/04

建系背景人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞系HK-2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過轉(zhuǎn)入HPV-16E6/E7基因構(gòu)建而成，并在無血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長了一年多。HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。陽性表達：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細胞角蛋白;α3β1整合素；纖連蛋白。陰性表達：因子VIII相關(guān)抗原、6.19抗原和CALLA內(nèi)肽酶呈陰性。常見問題在培養(yǎng)HK-2細胞的時候，常會出現(xiàn)一些細節(jié)問題，不可掉以輕心。本文為大家總結(jié)培養(yǎng)HK-2