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2022
07-25

紫外交聯儀交聯過程中各種單位如何換算
威尼德生物科技（北京）有限公司，使用UVA(365nm)、UVB(302nm)、UVC(254nm)三種波長制造了四款紫外交聯儀，主要包括VL-1000A（365nm）、VL-1000B（302nm）、VL-1000C（254nm）、VL-3000（三種波長），每款設備實時顯示燈管功率，方便用戶采用時間模式更加精準計算樣品得到的能量文獻中的設定值通常以mJ/cm2或J/m2單位進行報告。在某些情況中，報告中會用功率單位描述通量（例如μW/cm2），在這種情況下，用戶應使用公式1確定能量。公式1.
2022
07-25

威尼德分子雜交儀VH-2000：核酸分子雜交中常用雜交管規格以及應用
在雜交管中進行探針標記以及預雜交和雜交，被許多分子生物學家認為是與Southern,Northern,Dot,SlotorColonyBlots等實驗的*佳方法。雜交管瓶內雜交意味著與傳統系統中進行的實驗相比，使用探針體積會顯著減少，并且探針在膜表面的持續移動會導致非常有效的雜交反應。在分子雜交儀中，溶液的溫度被精確控制和調節一般雜交管都采用進口低溶出硼硅酸鹽玻璃制作，堅固耐用，熱穩定性優良，可用于大部分的標準分子雜交儀，比如威尼德生物科技（北京）有限公司，分子雜交儀VH-1000經濟型、分子雜
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：聚丙烯酰胺凝膠電泳操作小技巧
1、讓凝膠電泳變得更快,更漂亮方法改進:將電泳電壓進行定時變化,例如可以在開始時將電泳電壓調節至100V,大約15min,使條帶的確可以因為自身片段大小不同而產生較大差別的泳動速度,從而將片段分離,然而現在的分離或許會間距較小,從而圖片很不漂亮,或者不易觀察.可以緊接著進行120V-130V的電壓進行較小差異電泳,但是由于電泳電壓較大,可以避免過大的片段殘存在膠孔不易泳動的情況.結果:這樣兩個電壓進行配合電泳,便可以得到非常漂亮的電泳條帶,并且可以節省1/5-2/5左右的時間.2、RNA電泳如何
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：基因克隆知識問答及FAQ
基因克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復制的載體DNA連接，然后將其轉入宿主細胞或受體生物進行表達或進一步研究的分子操作的過程，因此基因克隆又稱DNA克隆、分子克隆、基因重組或重組DNA技術。基因克隆涉及一系列的分子生物學技術，如目的DNA片段的獲得、載體的選擇、各種工具酶的選用、體外重組、導入宿主細胞技術和重組子篩選技術等等。為了方便大家學習和交流，我以問答形式介紹基因克隆及其常見問題，希望對大家有所幫助。Q1：如何獲取一個已知基因的序列？A1：對已知序列的基因克隆
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：核酸分子雜交中雜交信號低于預期的影響因素
1放射自顯影期間膜對膠片的曝光時間不足。2核酸轉移或結合在尼龍膜上的效率低3目標序列以非常低的拷貝數存在。增加加載到凝膠上的樣品量。4沒有足夠數量的探針序列，增加探針的濃度或加入10%硫酸葡聚糖，這樣減少了溶劑體積，可以到到相同的效果。5沒有探針同源性。6雙鏈DNA探針未變性，或者，探針檢測儀性能下降。在使用RNA探針時發生可能更大。7探針的比活性太低。考慮諸如標記反應中的探針濃度、放射性標記的三磷酸鹽的半衰期等因素。8雜交和/或洗滌過程中試驗方法不佳：1）增加鹽的濃度。2）降低溫度。3）降低S
2022
07-23

威尼德核酸分子雜交試驗問題歸納與總結
常見問題Q1：標記方法有哪幾種？A1：（1）切口平移法（2）隨機引物法（3）末端標記法（4）單鏈DNA探針標記（5）寡核苷酸探針標記法Q2：探針標記物的分類有幾種？A2：（1）探針標記物有放射性核素與非放射性物質兩種。放射性核素標記敏感性高，可檢測pg水平的核酸，但因不易長期保存，且存在放射性污染等問題，現已較少應用。（2）非放射性物質常用的有生物素、地高X等，非放射性探針安全、穩定、操作方便并且經濟，但敏感性較低，近年來，由于雜交信號檢測方法的改進，檢測的敏感性得到了很大提高。Q3：怎樣確定探
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western 中NC膜、PVDF膜、尼龍膜的差別
硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane，簡稱NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術目前較為常用，先將待測核酸結合到一定的固相支持物上，再與液相中的標記探針進行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western試驗問題歸納與總結
Q1:PVDF膜和硝酸膜結合蛋白的原理是什么？A1:一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質相聯，若反復洗幾次后，蛋白容易掉下來，效果較差。尼龍膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合（注：常用的PVDF膜即帶正電荷的尼龍膜），同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，效果較好。Q2:做組織樣品的westernblot的時候，處理樣品有什么訣竅？A2:必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western blot 實驗原理及試驗步驟
經典實驗步驟是將提取的蛋白電泳—轉膜---一抗孵育---二抗孵育---底物顯色---分析。我這幾天幾乎都在重復著這個過程，現在將自己試驗過程記錄下來，和大家一起分享，希望對新手有所幫助。1.蛋白提取傳統方法是(1)組織稱重(2)利用液氮、研缽粉碎組織塊(3)加入RIPA緩沖液，PMSF(4)勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分鐘，移入離心管4℃離心15分鐘(6)上清液為細胞裂解液可分裝-20℃保存。一部分進行Bradford比色法測定蛋白質濃度，取相同質量的
2022
07-21

如何正確理解紫外交聯儀中三種波長 365,302、254
紫外線是指通過棱鏡將自然光分成赤、橙、黃、綠、青、藍、紫七色光,波長較紫色光更短的一類光線的總稱．它廣泛存在于自然界中,與人的生活密切相關。根據生物效應的不同,將紫外線按照波長劃分為四個部分:A波段(UVA),又稱為黑斑效應紫外線(400～315nm);B波段(UVB),又稱為紅斑效應紫外線(315～280nm);C波段(UVC),又稱為滅菌紫外線(280～100nm);D波段(UVD),又稱為真空紫外線(VacuumeUV)(200～10nm)。很多年之前，紫外線就已被用于防止物體表面微生物的

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