保存溫度
2-8℃避光
注意事項
1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請盡快使用完！
2.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
顯微鏡
適用樣本
1. 石蠟切片
2. 冰凍切片
2. 冰凍切片
儀器準備
1. 顯微鏡
2. 37℃溫箱
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 37℃溫箱
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
試劑準備
1. 固定液：選用甲醛或甲醛鹽溶液
2. 蒸餾水
3. 系列乙醇
2. 蒸餾水
3. 系列乙醇
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
1. 取A1、A2等量混合即為 Weigert鐵蘇木素染液，一般24h失去染色力。
2. 每個染色步驟均要保持玻片濕潤。
3. 切片脫蠟應盡量干凈。
4. 固定起著重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時間。
5. 試劑B分化時間應根據切片厚薄、組織類型很新舊不同。
6. 試劑F磷鉬酸分化時要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時間根據染色深淺而定，一般1～2min。
7. 鏡檢觀察時若膠原纖維部分藍色著色太淺，可用復染液復染2-3分鐘，至顏色合適為止。復染液染色時間不宜過長，否者顏色過深會造成對比不強烈。
8. 若整體染色效果不佳，可用水浸泡60-90分鐘，褪色后，再重復染色。
2. 每個染色步驟均要保持玻片濕潤。
3. 切片脫蠟應盡量干凈。
4. 固定起著重要的作用，使用不同的固定液可延或縮短染色時間。
5. 試劑B分化時間應根據切片厚薄、組織類型很新舊不同。
6. 試劑F磷鉬酸分化時要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時間根據染色深淺而定，一般1～2min。
7. 鏡檢觀察時若膠原纖維部分藍色著色太淺，可用復染液復染2-3分鐘，至顏色合適為止。復染液染色時間不宜過長，否者顏色過深會造成對比不強烈。
8. 若整體染色效果不佳，可用水浸泡60-90分鐘，褪色后，再重復染色。
使用方法
試劑配制：
臨用前A1和A2等量混合均勻即為染液A，24小時內使用，不可預先配制。
樣本的染色前處理：
石蠟切片
1. 脫蠟：二甲苯中脫蠟10-15分鐘。再換用新鮮的二甲苯脫蠟10-15分鐘。
2. 將脫蠟后的片子用95%乙醇浸泡2分鐘，再分別用70%、30%乙醇各2分鐘。
3. 水合：蒸餾水中浸泡2分鐘。
4. 漂洗：30-40℃水漂洗兩次，每次30-60秒。
樣本的染色
1. 用蒸餾水潤濕玻片30-60秒。
2. 用新鮮配制的染色液A染色5-10分鐘。
3. 分色液B分色6-8分鐘。水洗。
4. 試劑C處理2-3分鐘。
5. 蒸餾水水洗1-2分鐘。
6. 染色液D染色5-10分鐘。
7. 按蒸餾水：弱酸E=2:1配制弱酸工作溶液，用弱酸工作液洗1分鐘。
8. 試劑F洗1-2分鐘。需要在鏡下觀察，處理到膠原纖維城淡紅色；纖維紅色即可。
9. 用弱酸工作液洗1分鐘。
10. 染色液G苯胺藍染色1-2分鐘。
11. 用弱酸工作液洗1分鐘。
12. 95%乙醇快速脫水。
13. 無水乙醇脫水3次，每次5秒。
14. 二甲苯透明3次，每次1分鐘。
15. 用封固劑封片。
16. 結果觀察。
結果：
細胞核、膠原纖維、粘液、軟骨為藍色；
胞漿、肌肉、紅細胞、纖維素、神經膠原為紅色。
臨用前A1和A2等量混合均勻即為染液A，24小時內使用，不可預先配制。
樣本的染色前處理：
石蠟切片
1. 脫蠟：二甲苯中脫蠟10-15分鐘。再換用新鮮的二甲苯脫蠟10-15分鐘。
2. 將脫蠟后的片子用95%乙醇浸泡2分鐘，再分別用70%、30%乙醇各2分鐘。
3. 水合：蒸餾水中浸泡2分鐘。
4. 漂洗：30-40℃水漂洗兩次，每次30-60秒。
樣本的染色
1. 用蒸餾水潤濕玻片30-60秒。
2. 用新鮮配制的染色液A染色5-10分鐘。
3. 分色液B分色6-8分鐘。水洗。
4. 試劑C處理2-3分鐘。
5. 蒸餾水水洗1-2分鐘。
6. 染色液D染色5-10分鐘。
7. 按蒸餾水：弱酸E=2:1配制弱酸工作溶液，用弱酸工作液洗1分鐘。
8. 試劑F洗1-2分鐘。需要在鏡下觀察，處理到膠原纖維城淡紅色；纖維紅色即可。
9. 用弱酸工作液洗1分鐘。
10. 染色液G苯胺藍染色1-2分鐘。
11. 用弱酸工作液洗1分鐘。
12. 95%乙醇快速脫水。
13. 無水乙醇脫水3次，每次5秒。
14. 二甲苯透明3次，每次1分鐘。
15. 用封固劑封片。
16. 結果觀察。
結果：
細胞核、膠原纖維、粘液、軟骨為藍色；
胞漿、肌肉、紅細胞、纖維素、神經膠原為紅色。
參考文獻
1. Yuyan Lu, et al.
Valsartan attenuates pulmonary hypertension via suppression of mitogen activated protein kinase signaling and matrix metalloproteinase expression in rodents
Molecular Medicine Reports 2017
2. Fei Hou, et al.
Attenuation of liver fibrosis by herbal compound 861 via upregulation of BMP-7/Smad signaling in the bile duct ligation model rat
Molecular Medicine Reports 2016
3. Huikuan Gao, et al.
Sequential changes in autophagy in diabetic cardiac fibrosis
Molecular Medicine Reports 2015
Valsartan attenuates pulmonary hypertension via suppression of mitogen activated protein kinase signaling and matrix metalloproteinase expression in rodents
Molecular Medicine Reports 2017
2. Fei Hou, et al.
Attenuation of liver fibrosis by herbal compound 861 via upregulation of BMP-7/Smad signaling in the bile duct ligation model rat
Molecular Medicine Reports 2016
3. Huikuan Gao, et al.
Sequential changes in autophagy in diabetic cardiac fibrosis
Molecular Medicine Reports 2015
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