Edman降解是什么?蛋白質測序的核心技術解析檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhì是生命活動的執行者,其一級結構(氨基酸序列)決定了其功能。要研究dànbáizhì的結構與功能,首先必須了解其氨基酸組成和排列順序。因此,dànbáizhì測序成為現代生命科學研究和生物醫藥開發中的關鍵步驟。而在眾多測序方法中,Edman降解(Edman degradation)被譽為dànbáizhì一級結構解析的“經典之選”。
一、什么是Edman降解?
Edman降解是一種用于確定dànbáizhìN端氨基酸序列的化學方法,由澳大利亞化學家Pehr Edman于1950年開發。其核心原理是:通過苯異硫氰酸酯(PITC)選擇性標記肽鏈的N端氨基酸,在溫和條件下裂解形成可識別的PTH-氨基酸衍生物,同時保留剩余肽鏈用于下一輪循環。這種逐步“剝離”氨基酸的方式,可以順序解析出dànbáizhìN端的氨基酸組成。
二、Edman降解的反應流程:
1、標記:PITC與肽鏈N端游離氨基反應,形成環狀酰胺中間體。
2、裂解:在酸性條件下切斷N端dìyī個氨基酸,與PITC形成穩定的PTH-氨基酸。
3、鑒定:使用高效液相色譜(HPLC)或其他方法檢測PTH-氨基酸種類。
4、重復循環:重復以上步驟,逐個剝離氨基酸,直到達到測序上限(一般為30個殘基以內)。
三、Edman降解的優勢與局限
? 優勢:
高保真度:逐個氨基酸識別,序列準確性高。
無需標簽:不需要對目標蛋白進行同位素或熒光標記。
對已純化蛋白有效:適用于單一dànbáizhì樣本的序列驗證。
? 局限性:
N端封閉限制:若蛋白N端被修飾(如乙酰化、甲酰化),將無法進行Edman反應。
不適合復雜混合物:只能對單一、多肽純度較高的樣本有效。
序列長度有限:一般測序上限為20–30個氨基酸殘基,無法覆蓋全長蛋白。
對蛋白量有要求:通常需要≥1 pmol級別的純蛋白輸入量。
四、Edman降解在科研中的應用
盡管現代質譜(MS)技術逐漸成為主流,Edman降解依然在以下領域具有dútè價值:
1、dànbáizhìN端驗證
在重組蛋白表達與純化后,研究人員常使用Edman降解確認目標蛋白是否有N端截斷、修飾,或起始密碼子翻譯是否正確。
2、抗體表位測序
Edman法適用于對單一多肽(如抗原肽、B細胞表位)進行序列確認,特別是在開發多克隆或單克隆抗體時。
3、結合質譜進行雙重驗證
在某些關鍵項目中,如臨床級蛋白藥物開發、蛋白工程研究,研究者會同時使用Edman降解和LC-MS/MS對序列進行交叉確認,確保結果無誤。
五、Edman降解 vs 質譜測序:互為補充
? 實踐經驗顯示,在Nduāncèxù、藥物質量控制、定量標準品開發等領域,兩者聯用效果zuì佳。
Edman降解作為dànbáizhì測序的奠基性技術,其高精度與可解釋性在某些應用中依然wúkětìdài。百泰派克生物科技堅持以科研需求為導向,致力于為高校課題組、科研機構及生物醫藥研發團隊提供高標準、可信賴的蛋白測序解決方案與技術支持。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!