蛋白質翻譯后修飾的常見研究策略檢測技術服務詳情介紹
在真核細胞中,dànbáizhì的結構和功能不僅由其氨基酸序列決定,更受到翻譯后修飾(Post-Translational Modifications, PTMs)的深遠影響。PTMs 是指dànbáizhì在翻譯完成后通過酶促作用被化學修飾的過程,這一機制參與了細胞信號轉導、基因表達調控、細胞周期、免疫應答等多種生物學過程。鑒于其在生理和病理狀態中的核心作用,dànbáizhì翻譯后修飾研究已成為蛋白組學中的關鍵領域。
一、常見的dànbáizhì翻譯后修飾類型
dànbáizhì可以經歷數百種不同的翻譯后修飾,其中zuì為常見且研究zuì深入的包括:
1、磷酸化(Phosphorylation)
磷酸化是zuì常見的PTM形式之一,通常發生在sīānsuān(Ser)、sūānsuān(Thr)和làoānsuān(Tyr)殘基上。它在信號傳導通路中發揮核心作用,調控酶活性、dànbáizhì穩定性和蛋白互作。
2、乙酰化(Acetylation)
乙酰化廣泛存在于組蛋白和非組蛋白中,對染色質結構、基因表達調控具有重要意義。賴氨酸殘基的乙酰化可以改變dànbáizhì的正電荷,從而影響其結構和功能。
3、泛素化(Ubiquitination)
泛素化是通過將小分子dànbáizhì“泛素”連接到目標dànbáizhì的賴氨酸殘基上,實現對其降解、定位或功能調節。多泛素鏈的構型還可決定不同的細胞命運。
4、糖基化(Glycosylation)
糖基化是將糖類基團共價附著到dànbáizhì上,常見于細胞膜蛋白和分泌蛋白。其不僅影響dànbáizhì折疊、穩定性和半衰期,也與癌癥、感染等疾病密切相關。
5、甲基化(Methylation)
甲基化可發生在賴氨酸或jīngānsuān殘基上,常見于組蛋白中,調控染色質狀態與基因沉默。同時也存在于代謝酶、轉錄因子等非組蛋白中。
二、dànbáizhì翻譯后修飾的研究策略
由于PTMs通常發生在低豐度、特異性位置且動態變化明顯,因此對其研究需要高度靈敏和特異的技術支持。以下為目前主流的研究策略。
1、親和富集策略:提高修飾肽的檢測效率
翻譯后修飾的一個挑戰在于其豐度低、修飾位點復雜,直接質譜檢測往往難以識別。為此,親和富集技術是研究PTMs的前提步驟。
抗體富集:針對特定修飾(如磷酸化、乙酰化)開發的單克隆或多克隆抗體可以高效識別目標肽段,例如使用anti-phospho-Ser/Thr/Tyr抗體進行磷酸肽富集。
金屬氧化物親和層析(MOAC)與IMAC:這兩種方法常用于磷酸肽的非抗體依賴型富集,TiO?和Fe3?離子可與磷酸基團強烈結合,提高磷酸肽的回收率。
Lectin富集:適用于糖基化研究,不同凝集素可識別不同類型的糖殘基結構,如ConA、WGA等。
親和富集后的樣品可顯著提高質譜分析中目標修飾肽的比例,增強檢測靈敏度和數據質量。
2、高分辨質譜分析:定性與定量的核心工具
質譜(MS)是研究PTMszuì強大的工具之一,尤其是Orbitrap、TOF等高分辨平臺。
數據依賴采集(DDA):通過對高強度離子優先碎裂,獲取修飾肽段序列信息,適用于修飾位點鑒定。
數據獨立采集(DIA):全面、重復性強,適合多樣本間修飾定量比較,常與Spectronaut、DIA-NN等軟件配合分析。
平行反應監測(PRM)與選擇反應監測(SRM):用于特定修飾肽的靶向定量分析,靈敏度高、定量jīngquè。
通過MS/MS譜圖解讀,可以確定修飾類型、修飾位點位置及其變化趨勢。
3、定量策略:揭示PTMs的動態調控機制
在比較不同處理條件(如刺激前后、突變體與野生型)下PTMs變化時,定量策略尤為關鍵。
TMT/iTRAQ標記:適用于多樣本并行定量分析,配合高通量MS平臺可實現數十個樣本中修飾變化的系統分析。
Label-free定量:對樣本處理簡便,不受標簽限制,適合大規模探索性研究,但對質譜平臺穩定性要求高。
SILAC:通過代謝標記將重同位素氨基酸摻入細胞中,適合細胞系的jīngzhǔn定量研究,尤其在泛素化等動態變化中表現優異。
4、生物信息學分析:從“點”到“網”的整合解讀
PTMs的研究不僅止于位點的鑒定,更需要系統地理解其在生物通路和功能模塊中的作用。
位點注釋:如使用PhosphoSitePlus、UniProt數據庫,識別已知與新發現的修飾位點。
富集分析:GO與KEGG通路富集幫助揭示修飾蛋白的功能傾向與生物學意義。
互作網絡構建:結合STRING、Cytoscape等工具構建蛋白互作網絡,挖掘核心調控節點。
修飾互作分析(Crosstalk):多個修飾類型之間可能存在協同或拮抗作用,如磷酸化-乙酰化“調控開關”的關系,是PTMs研究的前沿方向。
dànbáizhì翻譯后修飾是解析生命活動精細調控的“密碼層”,其研究對于疾病機制揭示、藥物靶點發現及生物標志物開發具有bùkětìdài的重要意義。通過整合樣本前處理、富集技術、質譜分析與生物信息學解讀,科研人員正不斷拓展dànbáizhì翻譯后修飾的研究。百泰派克生物科技依托深厚的蛋白組學技術積累和gāoduān質譜平臺,持續為生命科學研究提供高質量的翻譯后修飾蛋白組分析服務,助力更多科研項目走得更深、更遠。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!