BY-0571 RAG小鼠腎腺癌細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0571
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- 更新時(shí)間 2025/7/8 14:28:00
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RAG小鼠腎腺癌細(xì)胞系
RAG小鼠腎腺癌細(xì)胞系源自 RAG 基因敲除小鼠的自發(fā)性腎腺癌，因 RAG1/2 基因缺失導(dǎo)致 T、B 淋巴細(xì)胞發(fā)育障礙，成為兼具腫瘤特性與免疫缺陷背景的du特研究模型。其在腎癌發(fā)病機(jī)制、免疫逃逸及細(xì)胞治療研究中展現(xiàn)出不可替代的價(jià)值，為連接腫瘤生物學(xué)與免疫缺陷模型搭建了關(guān)鍵橋梁。
顯微鏡下，該細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)以多邊形和上皮樣為主，宛如覆蓋在培養(yǎng)皿表面的 “不規(guī)則鱗片”。細(xì)胞直徑約 18-25 微米，較普通腎小管上皮細(xì)胞略大；胞質(zhì)豐富，可見散在的脂滴樣空泡 —— 這是腎腺癌的典型胞質(zhì)特征；細(xì)胞核呈橢圓形或不規(guī)則形，核質(zhì)比約 1:2，染色質(zhì)呈粗顆粒狀，核仁清晰（1-2 個(gè)），偶見雙核細(xì)胞，顯示出腫瘤細(xì)胞的異型性。細(xì)胞增殖速度中等，倍增時(shí)間約 48-60 小時(shí)，當(dāng)融合度達(dá) 80%-90% 時(shí)需傳代，傳代時(shí)通過溫和吹打結(jié)合短時(shí) EDTA 處理使細(xì)胞脫落，按 1:4 比例接種，連續(xù)培養(yǎng) 40 代仍能保持穩(wěn)定的腫瘤表型。
培養(yǎng) RAG 小鼠腎腺癌細(xì)胞需模擬腎臟微環(huán)境。基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用 DMEM/F12 混合液，其高糖成分（4.5g/L）可滿足腎癌細(xì)胞的能量需求；添加 10% 胎牛血清提供生長(zhǎng)因子，其中血清中的表皮生長(zhǎng)因子（EGF）對(duì)維持細(xì)胞的上皮特性至關(guān)重要。培養(yǎng)環(huán)境需嚴(yán)格控制在 37℃、5% CO?，pH 值穩(wěn)定在 7.3-7.5，通過培養(yǎng)基中的酚紅指示劑監(jiān)測(cè)酸堿變化。與普通腎癌細(xì)胞系不同，該細(xì)胞對(duì)血清批次敏感，需篩選能維持其腫瘤標(biāo)志物（如碳酸酐酶 IX、VEGF）表達(dá)的血清，每批血清需經(jīng) Western blot 驗(yàn)證，確保標(biāo)志物表達(dá)量波動(dòng)不超過 20%。
在腎癌發(fā)病機(jī)制研究中，該細(xì)胞系是解析基因突變與腫瘤進(jìn)展關(guān)系的理想工具。其保留了原發(fā)腫瘤的關(guān)鍵突變特征，如 VHL 基因失活 —— 這與人類透明細(xì)胞腎癌的常見突變高度吻合。實(shí)驗(yàn)顯示，該細(xì)胞在缺氧條件下（1% O?）的 HIF-1α 蛋白穩(wěn)定性顯著提高，下游靶基因 VEGF、GLUT1 的表達(dá)量上調(diào) 4-6 倍，wan美模擬了腎癌的缺氧適應(yīng)機(jī)制。通過 CRISPR 技術(shù)修復(fù) VHL 基因后，細(xì)胞的克隆形成能力下降 50%，裸鼠成瘤體積縮小 60%，直接證明 VHL 失活在腎癌發(fā)生中的驅(qū)動(dòng)作用。
在免疫逃逸研究中，RAG 小鼠腎腺癌細(xì)胞的免疫缺陷宿主背景提供了du特優(yōu)勢(shì)。由于宿主缺乏功能性 T、B 細(xì)胞，可單獨(dú)評(píng)估腫瘤細(xì)胞與固有免疫細(xì)胞的相互作用。例如，該細(xì)胞高表達(dá) PD-L1 分子，與巨噬細(xì)胞表面 PD-1 結(jié)合后，可抑制巨噬細(xì)胞的吞噬活性（吞噬率下降 35%），并誘導(dǎo)其向 M2 型極化（IL-10 分泌增加 2 倍）。這一發(fā)現(xiàn)為腎癌 “劫持” 固有免疫的機(jī)制提供了直接證據(jù)，也解釋了為何部分腎癌患者對(duì) PD-1 抑制劑單藥治療響應(yīng)率低。
在細(xì)胞治療研究中，該細(xì)胞系是驗(yàn)證過繼性細(xì)胞療法的理想模型。因其來源的宿主無(wú) T 細(xì)胞，可避免移植物抗宿主病（GVHD），直接評(píng)估輸注的 CAR-T 細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)顯示，靶向碳酸酐酶 IX 的 CAR-T 細(xì)胞與該細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，殺傷效率達(dá) 85% 以上，且在荷瘤 RAG 小鼠中可使腫瘤體積縮小 70%，生存期延長(zhǎng) 2 倍。這一模型為優(yōu)化 CAR-T 細(xì)胞的抗原靶點(diǎn)和輸注劑量提供了可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
在藥物篩選領(lǐng)域，該細(xì)胞系可用于評(píng)估免疫聯(lián)合療法的效果。例如，將抗血管生成藥物（如舒尼替尼）與 PD-L1 抗體聯(lián)用，通過檢測(cè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如 IFN-γ、TNF-α）和腫瘤微環(huán)境中的血管密度，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合治療可使腫瘤壞死面積增加 40%，遠(yuǎn)高于單藥治療（15%-20%）。這種 “抗血管 + 免疫” 的協(xié)同效應(yīng)在該模型中得到清晰驗(yàn)證，為臨床方案優(yōu)化提供參考。
培養(yǎng)過程中，需特別注意該細(xì)胞的貼壁依賴性較強(qiáng)，傳代時(shí)避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。凍存時(shí)使用含 15% DMSO 的血清凍存液，采用程序降溫盒降至 - 80℃后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇存活率可達(dá) 75% 以上。與普通腎癌細(xì)胞系相比，其對(duì)hua療藥物（如shun鉑）敏感性較低，IC50 值約為普通細(xì)胞的 2 倍，這與其高表達(dá) ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（如 ABCG2）有關(guān)，為研究腎癌耐藥機(jī)制提供了天然模型。
前沿研究中，該細(xì)胞系的應(yīng)用持續(xù)拓展。在類器官構(gòu)建中，將其與腎間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，可形成具有腎小管樣結(jié)構(gòu)的三維腫瘤模型，用于研究腫瘤 - 基質(zhì)相互作用對(duì)藥物響應(yīng)的影響；在單細(xì)胞測(cè)序中，解析其異質(zhì)性亞群，發(fā)現(xiàn)高表達(dá) CD133 的細(xì)胞亞群具有更強(qiáng)的成瘤能力和耐藥性，為識(shí)別腎癌干細(xì)胞提供了標(biāo)志物；在基因編輯領(lǐng)域，通過敲入熒光素酶基因，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，為評(píng)估藥物的體內(nèi)療效提供可視化工具。
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